[发明专利]单分散聚甲基丙烯酸酯离子交换层析介质在磺达肝癸钠柱层析纯化中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物纯化领域，具体涉及磺达肝癸钠的柱层析纯化领域。

背景技术

磺达肝癸钠（Fondaparinux sodium）是戊聚糖钠最小重复片段的五糖物质，它是一种活化凝血因子Ⅹa的特异性抑制剂，主要用于血栓栓塞疾病防治，它的应用在很大程度上解决了抗凝药物一直以来困扰医师的两难问题——在抗凝强度和出血风险中找到一个平衡支点。

磺达肝癸钠由人工合成，一般合成方法都需要经历50个以上步骤，因此最后的粗品中杂质含量复杂，且磺达肝癸钠有效含量较低（一般为60-80%），经过一步提取到高纯度（98%以上）较困难。

离子交换层析介质是生物分子分离纯化中最常用的方法之一，广泛应用于抗生素、核酸、多肽、蛋白质、以及天然产物的分离纯化。其主要由三部分组成，第一部分是骨架结构，即载体；第二部分是固定在母体结构上的带电功能基团；第三部分是与功能基团带相反电荷的离子对。与传统的离子交换树脂相比，用于生物大分子分离的离子交换层析介质除了具备高的离子密度、具有一定的耐压、耐酸碱性能外，还要求母体结构足够亲水以消除其与生物分子的非特异性吸附，并且要具备均匀的粒径。目前用于生物大分子分离的介质大多数不具备所有的以上特点，在实际应用中具有缺陷。

J.Hradil等（Reactive Polymers, 1990,13,43-53）分别使用甲基丙烯酸环氧丙酯/乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚物(GMA/EDMA)和甲基丙烯酸羟乙酯/乙二醇二甲基丙烯酸酯共聚物(HEMA/EDMA)为基质，合成粒径分别为250-400μm和100-200μm强阴离子交换树脂，相比聚苯乙烯/二乙烯基苯基质，该方法后续修饰使用的试剂对环境的危害较小；但是，其合成的树脂颗粒较大，不均匀，很难做到高分辨率分离，而且，该基质虽然较为亲水，但应用在生物分子分离上，其亲水性还无法满足要求，限制了其在生物分离上的应用。

Hongdeng Qiu等（Journal of Chromatography A, 2006, 1103,265–270）使用硅胶为基质键合上了含强阴基团的硅烷偶联剂，合成的强阴型离子交换层析介质用于小分子的分离纯化。该介质具备很好的机械强度，对混合物的分离效果较好，但是硅胶基质的离子交换层析介质不耐碱性，在很大程度上限制了它的应用范围。

美国专利20050020536公开了一种以琼脂糖为基质的Q Sepharose Fast Flow(GE Healthcare)分离纯化磺达肝癸钠的方法，该方法以氯化钠水溶液为流动相，得到99%的纯度。但是该方法使用的介质为琼脂糖骨架，其在不同流速下柱体积会发生变化，而且相对聚丙烯酸酯基质，其在较高压力条件下会发生变形，这限制了其在高流速分离中的应用。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种能达到高纯度和高回收率，而且柱层析不会随着盐浓度和流速的变化而发生变化，层析填料可耐高压和高流速的层析介质。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案是，单分散聚甲基丙烯酸酯离子交换层析介质在磺达肝癸钠柱层析纯化中的应用，采用单分散聚甲基丙烯酸酯离子交换层析介质为填料的色谱柱进行柱层析。 

优选的，用所述单分散聚甲基丙烯酸酯离子交换层析介质作为色谱柱的固定相，将含磺达肝癸钠的样品上样于该色谱柱上，用盐的水溶液作为流动相洗脱吸附在固定相上的磺达肝癸钠。

优选的，所述盐的水溶液是NaCl的水溶液。

优选的，所述单分散聚甲基丙烯酸酯离子交换层析介质是由苏州纳微生物科技有限公司生产，产品型号为Uni Q-50S。

将单分散聚甲基丙烯酸酯离子交换层析介质Uni Q-50S作为填料转入色谱柱成为固定相，把含有待分离或分析含磺达肝癸钠的溶液流过该色谱柱，然后用盐的水溶液作为流动相流过色谱柱，洗脱吸附在固定相Uni Q-50S上的待分离或分析的含磺达肝癸钠溶液。

本发明的有益效果是：单分散聚甲基丙烯酸酯离子交换层析介质Uni Q-50S不但利于以水溶液做流动相分离纯化磺达肝癸钠粗品，达到高纯度和高回收率，而且柱层析不会随着盐浓度和流速的变化而发生变化，层析填料可耐高压和高流速，同时可使用低盐浓度将吸附在层析柱上的磺达肝癸钠洗脱下来。

附图说明

图1是实施例1中使用的苏州纳微生物科技有限公司单分散聚甲基丙烯酸酯离子交换层析介质Uni Q-50S扫描电镜照片。