[发明专利]水溶性四唑盐

说明书

本申请是中国专利申请号200680004439.5(PCT/US2006/001307)，申请日2006年1月13日，发明名称为“水溶性四唑盐”的分案申请。

技术领域

本发明涉及用于医学目的的生物样品的分析。

发明背景

生物样品的分析通常涉及其中颜色与样品中分析物的量成比例显示的方法。例如，可以使用酶来氧化所考虑的分析物并且通过指示剂化合物的变色显示反应程度。本文特别感兴趣的是用作指示剂的四唑盐的家族。此类盐被还原物质还原成甲(formazan)染料。为了测量分析物，酶(例如，NAD-依赖性脱氢酶)将分析物氧化而产生还原形式(例如，NADH)，后者与四唑盐反应产生有色的甲。可能需要媒剂以促进反应。因为由分析物反应产生的NADH的量与所产生的甲的量成比例，所以可以通过所形成的颜色间接地测量分析物的量。

四唑盐已经用于各种应用。但是，特别地，它们已经用于测量各种生物流体例如血液、尿、血浆和血清中的分析物的医学领域。这些指示剂通常以放在试验条上的反应物体系方式使用，当与流体样品接触时，它们与所考虑的分析物反应并且显示指示所存在的分析物的量的颜色。虽然在某些情况下，可以参考比色图表视觉上读取颜色变化，但是更准确的读取可以通过为这种目的而设计的仪器以分光光度方式进行。通常，将光射到该试验条上并且测量反射光来测定试验条上的变色效果。

四唑盐应该产生甲，所述甲在避免由于样品中的物质，例如全血中的血红蛋白干扰的波长下吸收光。因此，已经开发出一类噻唑基四唑盐，它们产生吸收波长大于大约640nm的光(例如由用作光源的LED产生的那些光)的甲。LED提供变化仅为大约±5nm的窄波长范围。此类噻唑基四唑盐在若干美国专利如美国专利号5,126,275；5,322,680；5,300,637和5,290,536中进行了公开。

大多数生物样品性质上是水性的，所以希望指示剂可溶于样品。然而，许多四唑盐是不易溶的。四唑盐的一个供应商(Dojindo Laboratories)具有一系列指示剂，通过将磺酸基添加到指示剂分子中而使这一系列指示剂变得更可溶。参见美国专利号6,063,587和公开的日本专利申请JP58113181A2和JP58113182A2。它们的WST系列四唑盐指示剂通常在公开分析方法的专利中提到。一个实例参见美国专利号6,586,199。据报道WST系列四唑盐的溶解度为大约10mg/mL水。当使用四唑盐的某些磺酸根和膦酸根平衡离子时，还可以增加溶解度，例如美国专利号5,250,695中公开的那样。

论述四唑盐指示剂的其它专利包括EP 0476455B1；US2004/0132004A1；WO 98/37157；美国专利号6,183,878B1；美国专利号6,207,292B1；美国专利号6,277,307B1；DE 21 47 466；美国专利号5,185,450；美国专利号5,196,314。

本发明发明人想要改进噻唑基四唑盐的溶解性同时保持它们在对由LED提供的入射光作出反应时由它们的甲在600-640nm范围内作出较平缓频谱响应的能力。如将从下面发明说明书中知道的那样，它们已经成功地提供具有更大溶解性同时保持所需频谱响应的噻唑基四唑盐。

发明内容

本发明包括新型噻唑基四唑盐。已经发现其中一些在水中具有比相关专利性噻唑基四唑盐更好的溶解性。改进溶解性使它们变得更容易施加到用于测量生物样品中分析物(例如血样中的葡萄糖)的试验条上。所述四唑盐的特征在于具有增加溶解性的烷基铵烷氧基取代基。根据一个实施方案，所述四唑盐由以下通式限定。

其中：

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基或杂烷基

a＝1-3

b＝0-3

R₁＝1-6C烷基

R₂和R₃之一是烷基并且另外一个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₂和R₃形成亚甲二氧基，

R₄和R₅之一是卤素并且另外一个是卤素取代的1-6C烷基，R₄和R₅中一个或两个是XN+H_b(R₁)_3-b，或