[发明专利]基于胶乳粒子包被视黄醇结合蛋白检测试剂盒

说明书

[技术领域]

本发明涉及医学免疫体外诊断领域，特别是一种基于胶乳粒子包被视黄醇结合蛋白检测试剂盒。

[背景技术]

视黄醇结合蛋白属于Lipocalin超家族，相对分子质量约21×10³，配体主要是全反式视黄醇，即维生素A，Kd＝20Nm，结合位点1。RBP主要负责结合、转运血浆中的维生素A。外源性的维生素A进入血液循环系统后，首先与RBP结合，视黄醇-RBP复合体进一步与甲状腺素运载蛋白(transthyretin，TTR)形成三元复合物而被转运。

肝脏是维生素A储存及RBP合成与分泌的主要场所。RBP的分泌严格受机体视黄醇含量的影响。有关RBP突变体和基因敲除小鼠的研究发现，血液中RBP的缺失，除了引起视觉功能障碍外，对机体其他方面功能没有明显影响，因此，RBP可能只是在膳食维生素A缺乏时为机体视黄醇的代谢稳定提供一种保障。

与疾病的关系：RBP是一种可自由通过肾小球、重吸收率很高的小分子量蛋白，在健康人尿中含量很低。糖尿病肾病患者早期就出现肾小管损害，尿RBP是诊断早期糖尿病肾病的一个较敏感的指标；慢性肾功能衰竭(CRF)患者血中RBP大量积聚。

RBP由肝细胞合成，当肝细胞损伤时，RBP合成受抑制，故检测血液RBP水平，可敏感地反映肝功能的改变。放免法检测发现，肝硬化和急、慢性肝炎的血清RBP水平均明显低于正常对照组，急性病毒性肝炎早期血清RBP含量下降比晚期更明显RBP与机体的营养状态：RBP不仅参与视黄醇的运转，其分泌也严格受机体维生素A含量的影响，大量口服视黄醇可导致血液及肝脏RBP下降。维生素A的缺乏可改变血液中RBP含量并抑制肝脏分泌RBP，机体营养不良或应激反应时RBP可迅速下降。由于RBP的半衰期相对较短，变化早于前白蛋白(PA)、转铁蛋白(TRF)等且灵敏性更高，故可作为判断营养状态应激反应的指标诊断方法

胶乳颗粒增强比浊法(particle-enhanced turbidimetric immunoassay，PETIA)是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。PETIA法大体分为两种。一种是散射比浊检测法；另一种是透射比浊检测法。这两种方法的基本原理非常相似，都是在高分子胶乳微球的表面交联单克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的散光性能或透光性能。而且，反应液散光性能或透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。PETIA检测方法是在均相反应体系中进行抗原、抗体反应及结果的测定。抗原、抗体反应后，直接测定反应液的吸光度值，省却了ELISA法反复孵育和洗板等烦琐操作步骤，几分钟就能获得结果，省时省力。此外，纳米免疫比浊法操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实地反映被测物质的含量。免疫比浊法的灵敏度虽然比ELISA法差一些，但足于检测到健康人血浆中许多标志蛋白的下限值，可完全满足临床检测要求。

视黄醇结合蛋白检测方法，由最初免疫电泳的定性检测，到放射免疫、荧光免疫和酶免疫的定量检测，以及到免疫比浊的自动化检测，发展十分迅速。目前，国内外免疫比浊法是最为普遍通用的方法。但是免疫比浊法原理基于抗体抗原免疫反应结合形成浊度，来检测血清中RBP的浓度。并没有采用检测信号方法技术，其最低检测限只能达到10mg/l。同时存在着开瓶稳定性不好、较易受溶血干扰等问题。在临床上只能用于肾功能的辅助诊断。

[发明内容]

本发明为了克服现有技术的不足，提供了一种高灵敏度、稳定性好、准确度高、抗干扰能力强的视黄醇结合蛋白检测试剂盒。

为了实现上述目的，本发明设计了一种基于胶乳粒子包被视黄醇结合蛋白检测试剂盒，包括试剂R1，试剂R2以及校准品，其中：

试剂R1为Tris-HCl缓冲体系，包括Tris-HCl缓冲液30-60mmol/l，PH值为7.2-7.6；聚合物60-95mmol/l；乙二胺四乙酸二钠6-13mmol/l；

试剂R2，包括羊抗人视黄醇结合蛋白多克隆抗体包被聚苯乙烯乳胶粒子致敏颗粒；磷酸盐缓冲液35-60mmol/l，PH值为7.2-7.6；

参考校准品，包括牛血清基质；根据牛血清基质的体积用量百分比，还包括防腐剂0.2-2.2％；稳定剂1-10％。

所述试剂R2中，聚苯乙烯乳胶粒子的直径为45-92nm。