[发明专利]人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物物质的分析方法，更具体的是涉及人工麝香中麝香酮(muscone)的血药浓度定量分析方法。

背景技术

面对麝资源日益严峻的局面，SFDA根据国家林业局通报的有关天然麝香、熊胆粉资源状况及库存原料数量，确定并公布需要使用天然麝香的中成药品种名单。而未获得批准的，将不能再使用天然麝香。国家对天然麝香的严格管理为早在1994年即被卫生部认定为“与天然麝香等同配方使用”的人工麝香提供了市场机遇。人工麝香是我国1993年开发成功的一类中药新药，与麝香具有相同的药理作用，具体来说具有开窍醒神、活血通络、消肿止痛、化腐生肌解毒之功效，主治热病神昏、中风痰厥、气郁暴厥、中恶昏迷、经闭、心腹暴痛、痈肿瘰疬、痹痛麻木，治疗一切虚损恶病。

麝香酮，化学名为三甲基环十五烷酮，是人工麝香中唯一公开的有效成分，具有兴奋动物呼吸的作用，应用后使动物呼吸频率和深度增加，对离体心脏有兴奋作用，可使家兔、狗、麻醉猫的血压上升。用猫乳头肌、豚鼠气管平滑肌等作实验，可观察到麝香酮能增强儿茶酚胺的作用。

麝香酮结构式

为了证明人工麝香确实与麝香酮在心血管疾病方面有相同疗效，必须研究对心血管系统起主要疗效的麝香酮在生物体内的代谢情况。以前用于测定人工麝香灌胃后大鼠体内麝香酮的分析方法还未见报道，主要是涉及麝香酮直接灌胃和静脉注射给药，分析方法主要为气相色谱法，所用内标为异补骨脂素和正十九烷，生物样品处理方法为经乙醚萃取三次合并提取液并N₂吹干，再加挥发性溶剂三氯甲烷或正己烷定容后测定。该分析方法存在的问题是生物样品处理步骤比较繁琐，麝香酮是易挥发物质，首先用乙醚提取三次的过程中有挥发损失，其次在用N₂吹干复溶的过程中也有损失，造成分析结果的误差。如此复杂的处理步骤也不便用于药代动力学研究的大样本检测。

麝香酮经胃肠道吸收后在人体内迅速代谢，其原型药物的血药浓度极低，Cmax约为3.14mg.L^-1，而人工麝香中麝香酮的含量仅约为0.86％，更加难以测定。为了能够开展直接了解人工麝香在体内的吸收、分布、代谢、排泄有关特征的动物及人体药代动力学研究，有必要建立一个灵敏度高、快捷方便的麝香酮血药浓度定量分析方法。

发明内容

本发明的目的是建立一个操作简便、准确度高、重现性好，能够测定大鼠人工麝香灌胃给药后麝香酮在体内的血药浓度定量分析方法。

实现上述目的的技术方案如下：

人工麝香中麝香酮的血药浓度定量分析方法，包括以下步骤：

(1)血浆样品处理：在用人工麝香灌胃后的大鼠血浆中，加入乙腈，以及内标工作液，混合涡旋，离心，取上清液置顶空进样器的顶空进样瓶中待测，所述顶空进样瓶中还加入有1wt％～5wt％NaCl水溶液；所述内标溶液为环己酮(或正己烷)的醇溶液；

(2)采用气质联用法进行测定。

其中一些优选实施例中，在用人工麝香灌胃后的大鼠血浆中，加入体积比为1∶1的乙腈，以及内标工作液，混合涡旋40～120s(更优选60～80s)，用以沉淀血浆蛋白，后以5000～8000r/min，优选6000～7000r/min，离心5～10min，优选6～7min，取上清液置顶空进样器的顶空进样瓶中待测；优选地，为了有助于样品的挥发，顶空进样瓶加入有1wt％～5wt％(更优选1wt％)NaCl水溶液

其中一些优选实施例中，顶空进样器的进样条件为：顶空平衡温度：90～97℃(优选95℃)；定量环温度：100℃～120℃(优选110℃)，传输线温度：110℃～120℃(优选120℃)；样品瓶平衡时间：3～10min；加压0.4～0.6min(优选0.4min)；定量环填充时间：0.1～0.2min(优选0.2min)；定量环平衡时间：0.1～0.2min(优选0.1min)；进样时间0.7～1min(优选1min)；高摆动多顶空(HS)提取，每个样品瓶提取1～3次(优选3次)；

本发明中，采用气质联用法进行测定时，的气相色谱仪使用毛细管柱HP-5MS 5％Phenyl Methyl Siloxane(苯基甲基硅氧烷，30.0m×250μm×0.25μm)，检测器：MSD；载气：高纯氦(He)，纯度＞99.999％，He流量：0.8～1.2ml/min，优选1ml/min；分流比：10∶1～15∶1，优选10∶1；进样口温度：200℃～220℃，优选200℃；辅助通道温度：270℃～280℃，优选280℃；