[发明专利]GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞工程技术领域，具体涉及GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6及其制备方法和应用。

背景技术

肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类生命健康，有报道显示，在所有疾病中，肝细胞性肝癌发病率居第五而病死率高居第三。据估计，全世界每年有超过100万新发现的HCC患者，约100万人病死。由于HCC早期症状和体征不明显或缺乏特异性，导致HCC的早期诊断率较低，患者就医时常为中晚期，丧失治疗机会（研究显示，早中期HCC可手术治疗，小肝癌手术切除术后5年生存率大约有62.9%，大肝癌术后5年生存率则仅为34.6%）。同时，由于HCC对放疗和化疗均不大敏感，预后总体较差，外科手术包括肝移植仍是治疗痊愈肝癌的唯一方法。然而，高复发与高转移率导致手术后长期生存率较低，治疗效果不理想。在目前治疗尚无更好治疗策略之际，对高危人群的有效筛选和HCC的早期诊断，是提高生存率、降低病死率的有效途径。而对小肝癌的早期发现和诊断，生物标志物最具优势。目前在肝癌诊断中最为经典和被公认的是甲胎蛋白AFP，但其阳性检测率也仅为30~60%，而且特异性不够，不能满足临床对AFP 阴性肝癌的早期诊断。肝癌的致病机理是一个多因素、多步骤的复杂过程，所以至今仍无一个特异指标能在临床上应用，通过联合检测多种指标可早期发现肝癌的发生、复发和转移，从而进行早期治疗。因此，寻找有效诊断和治疗靶标，已成为HCC研究的重点、难点及方向。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 (glypican-3，GPC3) 是膜性硫酸乙酰肝素多糖蛋白，在胎儿肝脏表达丰富，在成人肝脏不表达，于肝癌发生时常常再激活，是HCC发生发展中的一个重要物质，李慎菁等用Northern 杂交结果显示GPC3 基因在正常肝脏组织中不表达，而在肝癌组织中为高表达，并同肿瘤大小及肝癌病理分级呈正相关，提示GPC3 基因在肝癌发生发展中起重要作用，与肝癌的病变程度有关。这说明该基因有可能是肝癌组织特异性的标志基因，可作为肝癌的临床早期诊断、治疗和判断恶性程度的参考指标，具有一定的临床应用前景。GPC3不但在肿瘤组织中特异性高表达，同时也可在外周血中被检测，Capurro等用ELISA法测得53%肝癌患者血清中存在GPC3的C端片段。而在样本量为53的健康对照组中无一阳性,在样本量为20的肝硬化患者对照组中仅一例阳性,提示GPC3较高的特异性。Nakatsura等用不同的C2端抗体亦取得相似的结果。其量的变化又与HCC病灶的存在与否、病情的严重程度密切关联（可反映手术前后的状态及治疗效果，较AFP敏感）。尤其是GPC3在AFP阴性肝癌中特异性表达，联合检测AFP和GPC3，可显著提高HCC的诊断检测率和准确性，因此被认为是一种极具潜能的新颖肝癌标志物。同时，研究还表明GPC3具有较高的免疫原性，在HCC的发生发展中起着非常重要的作用，有可能成为肝癌靶向治疗的新靶点。

目前可以检测GPG3的抗体产品均为国外一些公司如BioMosaics的产品，价格昂贵，限制了该蛋白作为临床靶标验证及其功能研究方面的应用。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中的上述不足，提供GPC3（人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3）单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6。

本发明的另一目的是提供上述GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6的制备方法。

本发明的又一目的是提供上述GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6的应用。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6，分类命名为磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6，于2011年11月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5427，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所，该细胞株本发明简称为GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6。

由上述GPC3单克隆抗体杂交瘤细胞株8G6分泌的单克隆抗体。