[发明专利]一种利用膨胀床富集分离螺旋藻藻蓝蛋白的方法

权利要求书

1.一种利用膨胀床富集分离螺旋藻藻蓝蛋白的方法，其特征在于步骤为：螺旋藻破壁液的制备；JDN-8微球在膨胀床中富集螺旋藻破壁液中的藻蓝蛋白；用破壁提取剂从膨胀床中洗出细胞碎片和其它杂质；洗脱分离藻蓝蛋白；洗脱液经冷冻干燥，最终获得一定纯度的藻蓝蛋白。

(1)螺旋藻破壁液的制备：用水或磷酸缓冲液作提取剂，磷酸缓冲液的浓度为25～100mmol/L，藻粉或鲜藻与提取液的固液比为1∶50～1∶150，搅拌均匀后，置于-10℃～-20℃下冷冻一定时间后，37℃融解，如此反复冻融4-6次，融化后获得的破壁液；

(2)JDN-8微球在膨胀床中膨胀富集破壁液中的藻蓝蛋白：在400mm×16mm玻璃柱内(液体分布器为200目丝网)加入10g的JDN-8微球，从柱底注入提取剂，使微球上浮形成膨胀床，微球床层的膨胀率为1.5～3.0，微球膨胀床层稳定20分钟后，在柱底将提取剂迅速切换为螺旋藻破壁液注入，破壁液的蛋白质浓度为0.2～0.5mg/ml，当柱顶流出液的蛋白质浓度为柱底注入破壁液的蛋白质浓度的70～80％时，膨胀床中JDN-8微球的吸附量达到饱和，停止注入破壁液；。

(3)用破壁提取剂从膨胀床中洗出细胞碎片和其它杂质：在饱和吸附藻蓝蛋白后，将JDN-8微球膨胀床的注入流体从破壁液迅速切换成提取液，微球床层的膨胀率与步骤2中相同，冲洗去除柱中的细胞碎片和其它杂质，直到柱顶流出液在550nm处的吸光度值A₅₅₀等于零；

(4)洗脱分离藻蓝蛋白：将去除细胞碎片和其它杂质的膨胀床静置，使床中的JDN-8微球自然沉降，将多余的液体放出，使液面刚好与柱床表面一致。从柱顶注入pH值为7.0、浓度为500～1000mmol/L的磷酸缓冲液，流速为20～100ml/min，从JDN-8型微球上洗脱收集富含藻蓝蛋白的洗脱液段；

(5)冷冻干燥：将收集的藻蓝蛋白的洗脱液冷冻干燥，得到纯度A₆₂₀/A₂₈₀＞2.0的藻蓝蛋白粉末。

2.根据权利要求1所述的螺旋藻藻蓝蛋白的富集分离方法，其特征在于采用以JDN-8微球为吸附载体的膨胀床技术直接处理螺旋藻冻融破壁液，无需去除破壁液中细胞碎片和其它杂质。

3.根据权利要求1所述的螺旋藻藻蓝蛋白的富集分离方法，其特征在于JDN-3型树脂制备：在容器中，放入纳米氧化镁颗粒、丙烯酸水溶液和大豆油，纳米氧化镁颗粒与大豆油的总量比为1∶10～20，丙烯酸水溶液中丙烯酸的浓度为20～70％，丙烯酸水溶液与大豆油的体积比例为1∶1～2，用Fluko FA25型均质泵分散乳化，加入0.2～0.5％的过硫酸钠(以水相体积计)，于30℃～40℃下在100～200r/min搅拌转速下搅拌2小时，过滤得到50～500nm粒径分布的JDN-8微球。