[发明专利]一种猪瘟活疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪瘟活疫苗，尤其是一种含有适量灭活草分枝杆菌菌体的猪瘟活疫苗。

背景技术

猪瘟(Classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病。该病唯一的自然宿主是猪，是危害养猪业最严重的传染病之一，死亡率能够达到90％以上(殷震，刘景华，动物病毒学(第一版)fMl，北京，科学出版社，1997，652-653)。

20世纪50年代，在各国研制出较为理想的灭活苗(Dalsgaard K，Overby E.Vaccination of pigs against hog cholera(classical swine fever)with a detergent split vaccine[J].Acta Vet Scand.1976，17：465-474)的同时，我国学者周泰冲等研究的中国系(C系)猪瘟兔化弱毒疫苗、日本的细胞弱毒疫苗、和法国的Thiverval株等都获得成功并在猪瘟控制中起了得重要的作用。这三大品系疫苗的广泛应用，改变了全世界猪瘟防制的窘迫局面。

目前，国内普遍使用的猪瘟活疫苗是1954年培育出猪瘟病毒兔化弱毒株(Hog Cholera Lapinized Virus，HCLV)制备而成的。该疫苗具有免疫力快、免疫谱宽、遗传稳定、无残毒、不引起胎儿畸变等优点。随着畜牧业的不断发展，对疫苗品质的要求也在不断提高，高效的猪瘟疫苗更是大势所趋。其中，使用免疫增强剂是一种常用的提高疫苗效力的方法。

草分枝杆菌是分枝杆菌中的一种，由于分枝杆菌胞壁酰二肽(MDP)具有很强的免疫治疗作用，草分枝杆菌多糖MPS在免疫调节、抑制病毒复制方面有很好的效果(周莉婷、赵晶晶等，分枝杆菌多糖免疫调节剂研究进展[J]，药物生物技术，2011，18(2)：176-179)，因而草分枝杆菌是一种优秀的免疫增强剂。草分枝杆菌可用于猪瘟活疫苗中，通过提高宿主自身的免疫应答能力来提增强疫苗免疫力，安全可靠。由于草分枝杆菌发酵方便、成本低廉，便于临床大面积推广使用。

草分枝杆菌菌体在添加到猪瘟活疫苗半成品之前需要灭活。由于普通的甲醛灭活剂有残留的风险，能对猪瘟病毒产生影响，我们考虑使用β-丙内酯对草分枝杆菌菌体进行灭活。由于β-丙内酯水溶液半衰期短(10℃时仅为18hr，25℃时为3.5hr，50℃时为20min，75℃时为5min)，能在疫苗液体中完全水解，不必考虑在成品疫苗中的残留，灭活的草分枝杆菌菌体中无灭活剂残留，能够有效保护猪瘟病毒的免疫原性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种更加高效的猪瘟活疫苗，从而在将猪瘟活疫苗的免疫水平提高到一个新的高度，更加有效的预防免疫猪群猪瘟的发生。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

将编号为CGMCC AS 4.1180的草分枝杆菌菌株，制备成草分枝杆菌菌体；

按常规方法用猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)兔化弱毒株(CVCC AV1412)制备成兔源抗原后，按每头份疫苗中含0.01～0.1mg，优选量为0.06mg加入草分枝杆菌草分枝杆菌(CGMCC AS 4.1180菌株)菌体后，再经过混匀、冻干等步骤，制成猪瘟活疫苗(兔源)；

按常规方法用猪瘟病毒兔化弱毒株(CVCC AV1412)制备成细胞源抗原后，按每头份疫苗中含0.01～0.1mg，优选量为0.06mg加入草分枝杆菌菌体后，再经过混匀、冻干等步骤，制成猪瘟活疫苗(细胞源)。

具体实施方式

1.草分枝杆菌菌株来源

本发明涉及到的草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)CGMCC AS 4.1180菌株购于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国普通微生物保藏管理中心，编号：CGMCC AS 4.1180(中国微生物菌种保藏管理委员会，中国菌种目录，机械工业出版社，1992，p285)。

2.草分枝杆菌菌体的制备

(1)种子培养

将草分枝杆菌CGMCC AS 4.1180株置于种子罐中进行培养，37℃通气培养，pH值为7.0，培养时间为3～4天，得到发酵用种子液；