[发明专利]一种燕窝生物素的提取及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及燕窝生物素提取及检测方法，具体的，涉及燕窝生物素的快速提取及高效薄层检测分析方法。

背景技术

燕窝主产于马来西亚和印尼，是一种极为名贵的中药材和保健品原料，具有养阴润燥、补中益气、入胃补脾和化痰止咳的功能。燕窝中的唾液酸，也是一种有效防止流感病毒的天然产物，从而加强免疫系统的功能。燕窝的主要成分有蛋白质 (62～63%) 、碳水化合物 (25.62～27.26%) 、灰分 (2.1%) 和油脂 (0.14～1.28%)。燕窝的主要氨基酸有天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸和半胱氨酸等。由于燕窝的营养价值很高而产量少，消费者需求日益增加，其价格也越来越昂贵，一些商贩通过染色、漂白，或以银耳、猪皮、琼脂、果胶等掺假伪造获取暴利。过去鉴定燕窝真假的方法主要是检测氨基酸、蛋白质和唾液酸的含量，由于检测指标少，而掺伪的人又能达到某些指标，所以燕窝真伪的分辨陷入尴尬的境地。因此，单一或两种简单的鉴别手段已无法判断燕窝产品真伪及优劣，必须采用多种手段结合，通过多种检测指标和检测结果的综合分析以获得正确的检测结果。生物素含量的检测可以作为鉴定真假燕窝的方法之一。这之前人们还未对燕窝里的生物素含量进行过检测，人们曾对除燕窝以外的其它材料检测过生物素的含量，其方法有微生物法、高效液相色谱法、气相色谱法、ELISA法和荧光法等，其中微生物法和高效液相色谱法是最常用的方法。然而，微生物方法操作麻烦和耗时（检测一个样品需2～3天的时间），而高效液相方法投资大、溶剂用量大、成本较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单、快速、准确、可靠的燕窝生物素的提取及检测方法。

本发明目的可通过以下技术措施来实现：

该方法按如下步骤进行：

a.取燕窝除杂、烘干碎成粗粉，按照1公斤燕窝粉与25～40升二甲基甲酰胺的配比于75                                                ～95水浴上搅拌提取1～2h，得提取液；

b.将提取液于高速离心机中离心，取离心液加入等体积量乙醇，在50～65条件下旋转蒸发浓缩，得样品液；

c.取样品液15l点在高效薄层板上，用氯仿：丙酮：甲醇：冰乙酸=1.5-2.5：1.5-2.5：1-2：0.01-0.1体积份比混合而成的展开剂在展开缸内展开，控制展距为6cm，并采用外标一点法点1l生物素标准品溶液，同时展开；

d.展开结束后取出展板晾干，然后用0.05%的高锰酸钾溶液喷雾染色，再将板放入100-120的烘箱中干燥8～12min，取出板后冷却；

e.将染色冷却好的展板放在薄层扫描仪上，以400nm吸收波长进行扫描，得燕窝中的生物素含量。

标准曲线的绘制：

取Sigma公司销售的生物素标准品溶解于二甲基甲酰胺，浓度分别为0.4, 0.99, 1.48, 2.51, 3.19 mg/ml，在高效薄层板上各点1l，用Camag薄层扫描仪3，以400nm的吸收波长扫描，经扫描仪的软件Wincats 1.4.1统计，得到的线性方程Y = 397.891+4.499X。相关系数r = 0.9995，RSD = 1.07 %。

2、燕窝生物素含量检测的准确度和可靠性

1）板内变异和板间变异：

制备1.48 mg/ml生物素标准溶液，在同一块高效薄层板上点四个点，每点为1l，分别在0，2，4和6h扫描测量，RSD=1.22%。

在板上分别滴1l即 1.48mg/ml和3.19 mg/ml标准品溶液早晚扫描定量，共测定2天。测得板内变异分别为0.56，1.17，0.78和1.02%，而板间变异分别为1.66，0.55，0.46和1.03%。

2）加样回收率：

向提取配制的样品液中，加50, 100 和150%的生物素标准品，其加样平均回收率为99.12%。

 

表-1 精确度

表-2板内变异和板间变异