[发明专利]一种枯草芽孢杆菌及其制剂和制备方法以及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌菌种、利用所述菌种制成的制剂、所述制剂的制备方法、所述菌种在制备防治作物霉菌病害的制剂方面的应用和所述制剂在防治作物霉菌病害方面的应用，属于生物农药技术领域。

背景技术

随着人们对于食品安全和环境保护的日益关注，“有机农业”已成为农业的发展方向，而开发出低毒、高效、低残留的纯天然生物农药已经成为近来农药研究的新方向。但由于生物农药的局限性，其通常药效较低，作用缓慢，价格高，所以难于被农民接受。

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），对人畜无毒无害，不污染环境，具有显著的抗菌活性和极强的抗逆能力。枯草芽孢杆菌菌体生长过程中会产生枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。同时枯草芽孢杆菌还能分泌大量几丁质酶，几丁质酶可分解病原真菌的细胞壁而抑制真菌病害。

枯草芽孢杆菌生长快、营养简单，能产生耐热、抗逆的芽孢，其芽孢具有抗逆性强、利于保藏的特点，又能忍受极端的外部环境而长期存活，可以制成粉剂、可湿性粉剂等各种剂型或与化学农药混用而不失活。因此有利于生防菌剂的生产、剂型加工及在环境中的存活、定殖与繁殖，而且批量生产工艺简单，成本也较低，施用方便，储存期长，是一种理想的生防微生物。国内外学者在枯草芽孢杆菌防治植物病害方面进行了大量研究。一些枯草芽孢杆菌优势菌株已经作为生物农药投入到植物病害应用中。目前，该菌已在黄瓜、辣椒、水稻、小麦、玉米、棉花等农作物上应用并显现出很好的病害防治效果。如申请号为200910148250.9的中国发明专利，公开了一种枯草芽孢杆菌微生物菌剂和复合微生物菌剂，该微生物菌剂和该复合微生物菌剂可以抑制茄子菌核菌和番茄灰霉菌等病原菌，克服现有技术中化学农药环保性差、易产生抗药性和安全性差等缺陷，以实现环保性好、不易产生抗药性和安全性好的优点。该微生物菌剂和复合微生物菌剂的抗菌谱较广，但是抗菌效果并不是很好，尤其是针对作物霉菌特别是霜霉菌的杀灭或抑制效果有待提高。

发明内容

本发明的目的是为解决上述技术问题提供一种枯草芽孢杆菌。

一种枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌的菌株已于2012年12月26日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心（地址:北京市朝阳区人屯路，邮编100101），保藏号为CGMCC No.5652。该枯草芽孢杆菌的生物学命名为Bacillus subtilis。

本发明的另一个目的是提供一种枯草芽孢杆菌制剂，它是由所述的枯草芽孢杆菌菌株经过发酵制成，包含有枯草芽孢杆菌菌体及其次生代谢产物。

作为上述技术方案的优选，所述制剂为可湿性粉剂。

本发明的再一个目的是，提供所述的一种枯草芽孢杆菌制剂的制备方法。

一种枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，包括以下步骤：

①将取出的菌株进行转接活化培养，培养基选择为LB或PSA；

②挑选活化的单菌落，再进行培养；

③将培养好的液体菌种，按0.5～4%的接种量，接种到液体培养基中；

④20～30℃培养1～3天；

所述液体培养基配方为：以重量百分比计，麦芽糖：0.2%～0.4% ，玉米粉：0.5%～0.8%，黄豆粉：0.4%～0.9%，胰蛋白胨：0.5%～1.0%，CaCl₂：0.02%～0.08%，MnSO₄：0.05%～0.08%，K₂HPO₄：0.1%～0.6%，余下为水。

作为上述技术方案的优选，它还包括以下步骤：

⑤将经过步骤④发酵培养所得发酵液通过干燥制得母粉，然后按比例加入载体填料、助剂、稳定剂和保护剂经粉碎制得所述制剂；

所述比例为按质量百分比计，发酵液60～70%，助剂5～15%，稳定剂1～5%，保护剂0.05～0.2%，载体填料补足100%；

所述助剂为缩聚萘磺酸盐、木质素磺酸钠、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、聚乙二醇、烷基萘磺酸盐、烷基萘磺酸缩聚物钠盐、SDS、DBS中的一种或多种；

所述稳定剂为CaCO₃、K₂HPO4、K₃PO₄、羧甲基纤维素钠、CaCl₂、NaCl中的一种或多种；

所述保护剂为玉米淀粉、大米粉、维生素C、羧甲基纤维素、糊精、荧光增白剂中的一种或多种；