[发明专利]复合纳米修饰丝网印刷电极及检测伏马毒素B1的方法

权利要求书

1.一种复合纳米修饰丝网印刷电极，其特征在于，所述丝网印刷电极的工作电极的工作区域涂覆有多壁碳纳米管-胶体金-壳聚糖混合物膜层。

2.如权利要求1所述的复合纳米修饰丝网印刷电极，其特征在于，所述胶体金为16～18nm。

3.一种制备如权利要求1所述的复合纳米修饰丝网印刷电极的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、将多壁碳纳米管活化，并制备胶体金，利用壳聚糖将多壁碳纳米管和胶体金混合均匀；

步骤二、将步骤一制得的混合物涂覆在丝网印刷电极的工作电极表面，37℃干燥成膜，即得。

4.如权利要求3所述的复合纳米修饰丝网印刷电极的制备方法，其特征在于，步骤一中所述多壁碳纳米管活化方法具体为：5mg多壁碳纳米管溶于15ml活化溶液中，超声30min后，9000rpm离心5min，去除上清后，加入超纯水洗涤，9000rpm离心5min，去除上清，合并残留物，60℃烘箱烘干，加入5ml水，配制成1mg/ml溶液，4℃贮存备用；所述活化溶液为体积比为1∶3的HNO₃和H₂SO₄。

5.如权利要求4所述的复合纳米修饰丝网印刷电极的制备方法，其特征在于，步骤一中所述胶体金的制备方法具体为：将100ml的HAuCl₄溶液加热至沸腾，之后加入1.2ml的柠檬酸三钠溶液，煮沸7～10min，最后加三蒸水至100ml，即得胶体金溶液；所述柠檬酸三钠溶液中柠檬酸三钠质量占溶液总体积的百分比为1％，所述HAuCl₄溶液中HAuCl₄质量占溶液总体积的百分比为0.01％。

6.如权利要求5所述的复合纳米修饰丝网印刷电极的制备方法，其特征在于，步骤一中所述壳聚糖与多壁碳纳米管和胶体金的混合具体为：将10μl多壁碳纳米管溶液和50μl胶体金溶液加入至50μl壳聚糖溶液中，超声混匀；所述壳聚糖溶液中壳聚糖质量占溶液总体积的百分比为2％。

7.一种用如权利要求1所述的复合纳米修饰丝网印刷电极检测伏马毒素B1的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将6μl FB1-OVA滴加在所述工作电极区域，37℃放置30min；使用0.01MPBST洗涤工作电极，晾干，滴加8μl BSA溶液，以封闭工作电极，37℃放置30min；所述BSA溶液中BSA质量占溶液总体积的百分比为1％；

步骤二，取0.75g待测样品，加入3ml甲醇溶液，震荡、静置、离心，使用0.01MPBS稀释5倍，取5μl备用；

步骤三，将抗FB1单克隆抗体分别与不同浓度的FB1标准品和待测样品稀释液混合，37℃孵育60min；

步骤四，使用0.01M PBST洗涤工作电极，晾干，滴加6μl步骤三制得的抗FB1单克隆抗体和FB1标准品或待测样品稀释液的混合溶液，37℃放置30min；

步骤五，使用0.01M PBST洗涤工作电极，晾干，滴加6μ1HRP标记的羊抗鼠二抗，37℃放置30min；

步骤六，使用0.01M PBST洗涤工作电极，并晾干，将丝网印刷电极放入10ml pH为7.4的0.01M PBS的缓冲液中，测定背景电流，记录为I₀；

步骤七，将丝网印刷电极取出，使用0.01M PBST洗涤工作电极，并晾干，放入10mlpH为7.4的0.01M PBS的缓冲液中，再加入过氧化氢和氢醌，使其浓度分别为2mM和0.1mM，搅拌溶液20min后，停止搅拌，测定电流，记录为I，电流变化值_ΔI＝I-I₀；

步骤八；使用Excel软件，将FB1标准品不同浓度与相对应的_ΔI绘制标准曲线，将待测样品相对应的_ΔI带入标准曲线中，得到FB1浓度，并乘以稀释因子，即为待测样品中FB1含量。

8.如权利要求7所述的复合纳米修饰丝网印刷电极检测伏马毒素B1的方法，其特征在于，步骤二中所述离心为3000转离心15分钟。

9.如权利要求7所述的复合纳米修饰丝网印刷电极检测伏马毒素B1的方法，其特征在于，步骤二中所述甲醇溶液中甲醇与水体积比为80∶20。