[发明专利]一种利用UPLC快速测定烟叶中茄尼醇含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用UPLC技术快速测定烟叶中茄尼醇含量的方法，属于液相色谱分析技术领域。 

背景技术

茄尼醇是一种无环四倍半萜醇，1956年首先从烤烟中提取并进行了结构鉴定。茄尼醇是一种天然化合物，广泛存在于哺乳动物、高等植物和微生物体内，尤其以烟草中含量最高。茄尼醇在生物化学中具有重要作用，具有非常强的吸收自由基的性能，本身可起到抗菌、消炎、止血抗溃疡作用和较强的抗癌活性，因此是药物合成的重要原料和泛醌类药物(如辅酶Q10、维生素K2和抗癌增效剂等)不可替代的关键中间体，具有极重要的医药开发价值。同时，茄尼醇作为烟草类脂组分中含量最高的组分，关于其对烟草品质和安全性影响的研究很早就引起了人们广泛的关注。烟草中的茄尼醇在烟草燃烧过程中，一部分直接转移到主流烟气中，一部分热解产生多种香气成分，有利于烟香味的改善，但另一方面，也会裂解产生多环芳烃(如致癌物PAHs)等有害物质，对烟草制品的安全性具有很大影响。 

目前，关于茄尼醇提取和纯化的研究比较成熟，多已形成专利。近年来，涉及茄尼醇的专利申请件有：201010523040.6号《一种超声 酶法辅助提取茄尼醇的方法》、200910234074.0号《一种高纯度茄尼醇的制备方法》、200810058493.9号《一种利用茄尼醇粗膏精制高纯度茄尼醇的方法》、200710034942.1号《从废次烟草中同时提取高纯天然烟碱和茄尼醇的方法》、200510104279.9号《从霉碎烟末中提取茄尼醇的预处理方法》、200410022233.8号《一种茄尼醇的精制方法》、93106316.7号《用霉烟或碎烟末提取茄尼醇的工艺方法》等。 

茄尼醇是长链半萜烯醇化合物，采用有机合成的手段制备非常困难，目前只能主要依靠从烟草中提取获得。因此，建立一种高效、精确的快速测定烟叶中茄尼醇含量的方法，对于烟叶中茄尼醇的提取纯化和烟叶安全性研究具有非常重要的现实意义。烟叶中的茄尼醇提取方法主要是溶剂萃取，常用的萃取方式有索氏提取、热回流萃取、机械震荡萃取、超声波萃取、超临界流体萃取和微波萃取等。烟叶中的茄尼醇测定方法主要有薄层扫描法、气相色谱法、液相色谱法和库仑滴定法等，其中薄层扫描法常用作定性研究为主，气相色谱法一般需要先对样品进行衍生化处理，步骤繁琐，库仑滴定法一般和薄层分离组合使用，步骤也较繁琐。液相色谱法是测定茄尼醇含量应用较多的一种方法，但多使用乙腈、甲醇、乙醇等两种以上的洗脱剂作为流动相，其与萃取液(丙酮、甲醇等有机溶剂)组成的差异，会对色谱峰形造成影响，影响定量的准确性。 

本发明采用分析速度更快、流动相用量更省的超高效液相色谱(UPLC)技术对茄尼醇进行分析，将常规液相色谱分析需要约20min才能完成的分析时间缩短为5min，大大节约了分析时间和有机试剂 用量；同时，方法对色谱的流动相组成等分析条件进行了优化，将烟草样品用甲醇溶液萃取过滤后，同样使用甲醇作为流动相，直接进行超高效液相色谱分离测定，在与标样进行比对保留时间定性的同时，采用比较标样和样品的质谱图的方式对分析方法共流出的干扰峰进行了检测和排除，建立了烟叶中茄尼醇含量的UPLC分析技术。实践证明，该方法操作简便、快速准确、灵敏度高，重现性好。目前尚无烟叶茄尼醇含量检测方法的技术专利申请。 

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术之不足，提供一种快速测定烟叶中茄尼醇含量的UPLC分析方法，该方法的提取方法简单，检测操作简便，灵敏度高，重现性好，能准确、快速地测定烟叶样品中茄尼醇的含量。 

实现本发明的技术方案是：一种利用UPLC快速测定烟叶中茄尼醇含量的方法，将烟叶研磨成粉末，称取50mg，将其置于50mL离心管中，加入25mL甲醇溶液，将离心管置于超声波振动器中超声萃取10min，取2mL萃取液，经0.22μm滤膜过滤得到的清液，用超高效液相色谱进行分析，测定烟叶中茄尼醇含量。 

本发明所述的一种利用UPLC快速测定烟叶中茄尼醇含量的方法，超高效液相色谱的分析条件为：ACQUITY UPLC H-CLASS超高效液相色谱-二极管阵列检测器，配Empower 2色谱工作站，色谱柱型号：BEH C18，1.7μm，2.1mm×50mm，色谱柱流动相为100％ 甲醇等度洗脱，流速为0.4mL/min，柱温30℃，进样量：2μL，检测波长为207nm，运行时间5min。 

本发明所述的一种利用UPLC快速测定烟叶中茄尼醇含量的方法，超高效液相色谱可串联有三重四级杆-飞行时间质谱。