[发明专利]一种烤烟GC/MS指纹图谱的建立方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于烟草品质分级领域，具体涉及一种烤烟质量分析、烤烟品牌识别和打叶配方中的品质分析方法。

技术背景

烟草作为一种天然植物，其成分相当复杂，目前已经分离鉴定出来的香气质成分就高达5000多种。这些成分对其品质都有或大或小的影响，若依据常规的化学检测只对其主要化学成分进行分析，以此来判别烟草的质量显然有失偏颇。因此，现在对烟草质量的识别主要依靠人工评吸。人工评吸虽然能从整体上把握，但是容易受个人情绪和感官差异性等主观因素的影响。有时也会出现较大偏差，且工作量大。

指纹图谱技术是一种着眼于整体，不追求分析对象的某个具体的细节，反应对象的整体特征，具有模糊性和专属性。该技术已经在中药等领域有较为成熟的发展。武政等人就曾通过HPLC的方法建立何首乌的指纹图谱评价其质量，结果与中国药典的结论相符合。黎琼红等人也建立了丹参的HPLC指纹图谱，在对11个不同产区丹参的分析中确定了14个共有峰，以之判别丹参的质量。在烟草香气质研究中，HPLC和GC／MS等仪器已成为常规的分析方法而广泛应用。

经检索，中国发明专利中与指纹图谱相关的发明专利申请涉及烟草和中成药鉴定等多个方面。经检索目前的相关专利文献如下：

1）申请号为CN201010548519.5 文献涉及功能食品活性成分检测方法领域，它以超临界CO2萃取蜂胶，然后进行GC-MS检测，构建指纹图谱。其GC/MS指纹图谱共有峰有8个，图谱总长度为60min。具体的步骤为：将蜂胶样品置于超临界CO2萃取釜中萃取后得到蜂胶的超临界CO2萃取物；称取蜂胶样品置于样品瓶中进行固相微萃取；再进行GC/MS分析；最后将不同地区蜂胶超临界CO2萃取物的GC/MS图谱进行比对，提取其共有峰，组成蜂胶超临界CO2萃取物的GC-MS指纹图谱。该发明方便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握。检测样品时间短，所得蜂胶超临界CO2萃取物挥发性成分达120余种。

2）申请号为CN200610149185.8 文献涉及一种消痛贴粉或膏或提取物GC及 GC/MS指纹图谱建立的方法及其标准指纹图谱。它涉及的质量控制方法由以下步骤组成：1.制备消痛贴供试品溶液，取消痛贴适量，精密称重，置索氏提取器中，加入乙醚回流提取，过滤，滤液作为供试品溶液。2.用GC及GC/MS对消痛贴指纹图谱18个共有峰中参考峰(10号峰)进行鉴定，鉴定结果10号色谱峰为桉叶醇。 3.依桉叶醇的特征峰为参考峰，计算相对保留时间、相对峰面积，即得消痛贴提取物的标准指纹图谱。该方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从色谱的整体特征面貌上把握消痛贴的质量情况，可作为消痛贴质量控制指标。

3）申请号为200410066701.1 文献涉及一种中药指纹图谱的制作方法，是一个用裂解-气相色谱-质谱联用技术来制作中药指纹图谱的方法，该方法包括下列三步步骤：1、中药材的裂解；2、GC/MS分析；3、计算机处理，获得标识混合体系的彩色二维条形码，即是使得计算机能够识别中药的指纹图谱。通过对同一药材或不同药材的标准谱图进行精确的类似度比较，根据类似度的大小，人们可对中药材进行鉴别。因而本发明制作方法可用来快速有效地鉴别中药材，控制中药材的质量，为提高中药生产现代化程度提供一个重要的手段。

4）申请号201010606325.6文献涉及一种贵州余庆GAP基地吴茱萸HPLC指纹图谱的建立方法。具体包括供试品溶液的制备，提取物的制备，色谱条件的确定，使用HPLC进行测定，并首次选用吴茱萸的两种伪品(花椒、马桑子)完成指纹图谱适用性检验，得到吴茱萸药材及其提取物HPLC指纹图谱，较全面地表达了吴茱萸药材及其提取物的整体化学信息，确定其指纹特征，该指纹图谱囊括了水溶性部分和脂溶性部分。它测定了12批吴茱萸药材样品的HPLC指纹图谱并进行分析比较，得到22个共有峰构成的吴茱萸药材指纹图谱。

5）申请号201110022623.5 文献涉及一种马尾松针挥发油成分的GC指纹图谱的建立方法。它按照挥发油的提取法制备供试溶液，共鉴别出17个特征峰，并以6号峰（石竹烯）为参照峰，计算各共有指纹峰的相对保留时间，相对保留时间的RSD均小于1.0% 。所有样品中，共有指纹峰峰面积之和占总峰面积之比值均大于69%。