[发明专利]养殖或屠宰环境中6种拟除虫菊酯类药物的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及牛、羊、猪、鸡、鱼和虾养殖和屠宰环境中甲氰菊酯，λ-氯氟氰菊酯，氟氯氰菊酯，λ-氯氰菊酯，氟胺氰菊酯，溴氰菊酯等6种拟除虫菊酯类药物的检测方法。

背景技术

拟除虫菊酯类农药脂溶性高、水溶性很差、在环境中残留期较长、代谢速度很慢。毒性特点主要为：①毒性强；②负温度依赖性；③选择毒性；④其它靶标位，各种受体、通道和酶均可能成为拟除虫菊酯的作用靶标。拟除虫菊酯类农药对人或哺乳动物毒性低或有中等毒性，但对蜜蜂和鱼则是高毒的，然而接触该类药物的人群会有慢性毒性表现：头痛、眩晕、恶心、皮肤瘙痒等。有报道称，长期接触该类药物会引起淋巴结和脾脏损伤，有致癌变的危险。原因在于拟除虫菊酯类农药可以影响人体内的钠离子通道，进而引起一系列神经毒性症状，例如：抽搐、战栗、共济失调、麻痹等。随着拟除虫菊酯类药物的大量滥用和过度使用，导致土壤和环境水的污染。而目前拟除虫菊酯类农药的检测对象主要是针对蔬菜、水果或动物源性的食品等，而针对土壤和环境水中拟除虫菊酯类农药的检测方法仍然缺失。

发明内容

本发明提供用于牛、羊、猪、鸡、鱼和虾屠宰和养殖环境的土壤和水体中甲氰菊酯，λ-氯氟氰菊酯，氟氯氰菊酯，λ-氯氰菊酯，氟胺氰菊酯，溴氰菊酯6种拟除虫菊酯类药物的免疫亲和柱净化-气质联用检测方法，以治理环境污染，提升我国环境质量。

本发明方法包括以下步骤：

(1)土壤样品中加入石油醚-乙醚超声振荡提取，取滤液挥干后用甲醇-磷酸盐缓冲溶液(pH≈7.8)溶解，准备过免疫亲和柱净化；

(2)环境水样品中直接使用磷酸盐缓冲溶液(pH≈7.8)稀释，准备过免疫亲和柱净化；

(3)滤液加入免疫亲和萃取柱，NaCl-PBS-20％甲醇溶液淋洗，甲醇溶液洗脱，正己烷定容。

(4)将定容样品溶液用气相-质谱进行分析测试，测得样品的色谱峰；

(5)将测得的色谱峰与各已知药物的标准色谱峰对照，确定所检出药物的名称。

上述步骤(3)所说固相萃取柱为自制的拟除虫菊酯类的免疫亲和萃取柱。

本发明采用空白土壤样本用石油醚-乙醚提取，磷酸盐缓冲液(PBS)溶解，自制备免疫亲和柱净化；环境水用磷酸盐缓冲液(PBS)调节pH值后利用免疫亲和柱净化。该方法专一性强、操作简单、检测低限低，土壤和环境水检测低限分别可达到20μg/kg和5μg/L。该方法为治理环境污染，制定相关行业及国家标准提供了参考。

具体实施方式

实施例土壤和环境水样品中拟除虫菊酯类残留检测

称取2g空白土壤样本，置于30mL离心管中，静置1h后，进行提取。加入石油醚-乙醚(1∶1，v/v)6mL。涡旋1min后进行超声水浴提取10min。离心(4000rpm，6min)收集上清液，重复提取一次，合并上清液，在45℃下旋转蒸发至至干，采用5mL甲醇复溶，移出溶液，离心后用20mL磷酸盐缓冲溶液(PBS)稀释，等待IAC净化。准确量取水样本100mL，过滤后，用磷酸盐缓冲溶液(PBS)稀释1倍，等待IAC净化。

将IAC柱用20mL PBS平衡后，上样，在重力作用下流出；然后进行淋洗，淋洗溶液是含有0.2M的NaCl-PBS-20％甲醇溶液，淋洗体积为20mL；最后用4mL甲醇溶液洗脱，并收集洗脱液；使用20mL水和15mL PBS溶液对IAC柱再生，最后将柱保存在4℃于0.01％叠氮钠-PBS溶液中。

将收集的洗脱液在氮气流下吹干，溶解于1mL环己烷溶液中，用GC-MS进行检测。

液相色谱-串联质谱仪测定典型条件：

Varian GC 3800-Varian Saturn 2000，；

毛细管色谱柱：VF-5ms column(30m×0.25-mm I.D.，0.25-μm，Varian)

载气：高纯氦，＞99.999％，流速为1mL/min

升温程序和进样口温度同1.3.1.

离子阱：温度是220℃

传输线温度：260℃

岐盒温度：45℃

倍增器电压：1750v

灯丝电流：50mA

扫描方式：MS/MS

表1、6种菊酯类药物的质谱参数