[发明专利]一种野油菜黄单胞菌必需基因及其编码的蛋白与应用

权利要求书

1.一种野油菜黄单胞菌必需基因，具有下述核苷酸序列之一：

(1)序列表中SEQ ID No.1的DNA序列；

(2)编码序列表SEQ ID No.2的氨基酸序列的多核苷酸。

2.根据权利要求1所述的野油菜黄单胞菌必需基因，其特征在于，所述必需基因的检测方法为：

1)利用序列表中SEQ ID No.3和SEQ ID No.4的多核苷酸作为引物，经PCR方法扩增序列表中的SEQ ID No.1的核苷酸序列全长片段；

2)将扩增出的核苷酸序列克隆到载体上，获得在严谨性启动子控制下的重组载体；

3)将重组载体转入野油菜黄单胞菌菌株中获得重组菌株；

4)利用重组自杀载体对重组菌株染色体上的必需基因核苷酸序列进行读框内删除获得突变体；

4)将该突变体置于培养基中，利用添加的严谨性物质作为诱导物，控制突变体中重组必需基因的转录水平，检测该必需基因对野油菜黄单胞菌生长的影响；

5)确定该基因是否为必需基因。

3.根据权利要求2所述的野油菜黄单胞菌必需基因，其特征在于，所述重组自杀质粒的制备方法为：

1)分别用PCR扩增必需基因的上游基因和下游基因，获得上游基因片段和下游基因片段；

2)将上游基因片段和下游基因片段分别克隆到自杀载体中获得重组自杀载体。

4.一种野油菜黄单胞菌必需基因编码的蛋白，具有序列表中SEQ ID No.2的氨基酸序列。

5.根据权利要求4所述的野油菜黄单胞菌必需基因编码的蛋白，其特征在于所述蛋白为野油菜黄单胞菌生长所必需的反应调节蛋白。

6.根据权利要求5所述的野油菜黄单胞菌必需基因编码的蛋白，其特征在于所述反应调节蛋白的检测方法为：

1)将³²P标记的醋酸磷酸与野油菜黄单胞菌必需基因编码的蛋白混合；

2)提取混合物样品，利用电泳方法分离并进行同位素信号检测确定所述蛋白是否被磷酸化。

7.根据权利要求5所述的野油菜黄单胞菌必需基因编码的蛋白，其特征在于所述反应调节蛋白的检测方法为：

1)将α-³²P标记的组氨酸激酶与野油菜黄单胞菌必需基因编码的蛋白混合；

2)提取混合物样品，利用电泳方法分离并进行同位素信号检测确定所述蛋白是否被磷酸化。

8.一种制备野油菜黄单胞菌必需基因编码的反应调节蛋白的方法，包括如下步骤：

1)利用序列表中SEQ ID No.9和SEQ ID No.10的多核苷酸作为引物，经PCR方法扩增序列表中的SEQ ID No.1的核苷酸序列全长片段；

2)将扩增出的核苷酸序列连接到载体上，转化到大肠杆菌菌株上；

3)将获得的大肠杆菌菌株进行培养后离心收集裂解后进行亲和层析获得重组蛋白。

9.一种控制野油菜黄单胞菌生长的方法，以野油菜黄单胞菌中的蛋白或编码该蛋白的基因作为靶标筛选能控制野油菜黄单胞菌的物质，所述蛋白具有序列表中的SEQ ID No.2的氨基酸序列；所述编码该蛋白的基因具有序列表中的SEQ ID No.1的核苷酸序列。

10.根据权利要求9的控制野油菜黄单胞菌生长的方法，其特征在于，所述方法是以控制野油菜黄单胞菌所述基因的转录来控制野油菜黄单胞菌的生长。