[发明专利]保健品、食品或原料中白藜芦醇含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测白藜芦醇含量的方法，特别是涉及应用液相色谱-质谱仪检测保健品、食品或原料中白藜芦醇含量的方法。

背景技术

白藜芦醇(英文名称为Resveratro1)化学名：(E)-5-[2-(4-羟苯基)-乙烯基]-1，3-苯二酚；3，5，4’’-三羟基芪；芪三酚；Trans-3-4’-trihydroxystilbene；分子式：C14H1203；分子量：228.25。

物理性质：无味、白色晶体粉末；难溶于水，易溶于乙醇，丙酮等有机溶剂。

白藜芦醇是一种天然的抗氧化剂，可降低血液粘稠度，抑制血小板凝结和血管舒张，保持血液畅通，可预防癌症的发生及发展，具有抗动脉粥样硬化和冠心病，缺血性心脏病，高血脂的防治作用。抑制肿瘤的作用还具有雌激素样作用，可用于治疗乳腺癌等疾病。延缓衰老、调节血脂、保护心脑血管、抗肿瘤活性、抗菌抗病毒、抗肝炎、白藜芦醇通过抑制血小板凝集和降低血脂的双重作用预防心血管疾病；减少心肌损伤和慢性缺血。具有降低血清胆固醇和甘油三酯在肝脏中沉积的功能；明显提高血清中高密度脂蛋白水平和抑制低密度脂蛋白氧化的作用。对PRL腺瘤有治疗和预防双重作用，在T细胞白血病药物治疗中也具有潜在应用价值。

植物来源：白藜芦醇是蒽醌萜类化合物，现阶段市场主要来源之一为于蓼科植物虎杖的根茎提取物。虎杖：多年生灌木状草本，高达1米以上。根茎横卧地下，木质黄褐色，节明显。茎直立，圆柱形，表面无毛，散生着多数红色斑点，中空。单叶互生，阔卵形至近圆形，长7-12cm，宽5-9cm，先端短尖，基部圆形或楔形；叶柄长1-1.5cm托鞘膜质，褐色，早落。花期7-9月，果期9-10月，春秋均可采挖，切断，晒干。多生于山谷、溪旁或岸边。分布去国中部及南部，产于江苏、浙江、江西、福建、山东、河南、陕西、四川等地。另一市场主要来源为葡萄穗轴，是葡萄酒厂的下脚料。因其成本极其低廉，且提取物不含有害添加成分，而逐渐为市场所接受。

检测食品和保健品中白藜芦醇含量现有的方法主要有以下几种：

1、气相色谱法

用乙酸乙酯萃取法对样品进行预处理，以硅烷化试剂对萃取物进行衍生。用GC进行定性与定量分析。其缺点就是衍生化形成的副产物可能对色谱分离造成较大困难；在衍生化过程中，容易引入杂质或干扰峰，或使样品损失。

2、高效液相色谱法(HPLC法)

用乙酸乙酯萃取法对样品进行预处理，但无需衍生化，相对步骤繁琐，且白藜芦醇的异构化会导致测定失真。失真原因是实验中发现，随着对照品在紫外光下的照射，反式白藜芦醇的色谱峰面积逐渐降低，而顺式白藜芦醇的色谱峰面积逐渐增大。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的测定步骤繁琐、耗时长且白藜芦醇在紫外线照射下的异构化会导致测定结果失真的不足，提供一种保健品、食品或原料中白藜芦醇含量的测定方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种保健品、食品或原料中白藜芦醇含量的测定方法，包括如下步骤：

(1)称取待测样品0.1-0.5g于锥形瓶中，加入40-60mL甲醇，于超声波水浴中处理20min，静置冷却至室温，在5000r/min离心5分钟，用快速定性滤纸过滤，滤液用甲醇定容至100mL；

(2)取步骤(1)所获得的溶液用甲醇稀释5000倍成待测样液；

(3)将所述待测样液注入高效液相色谱-质谱仪，用反相C18色谱柱进行色谱分离，质谱仪进行检测；

(4)精确称取白藜芦醇标准品10mg于100mL容量瓶中，用色谱甲醇超声溶解定容至刻度为标准储备液；将所述标准储备液用甲醇分别稀释，配成0.1μg/mL，0.2μg/mL，0.4μg/mL，0.8μg/mL，1μg/mL的溶液；分别注入高效液相色谱-质谱仪，用反相C18色谱柱进行色谱分离，质谱仪进行检测；得到标准曲线；

(5)将步骤(3)获得的检验数据通过标准曲线计算待测样品中白藜芦醇浓度；

所述HPLC条件：

流动相及梯度洗脱条件：A：体积百分比为25％的乙腈水溶液，B：10mM乙酸铵水溶液，等度洗脱；

进样量：10μL；

柱温：35℃；

流速：0.3mL/min；

所述MS/MS条件：

电离方式：电喷雾电离，正离子ESI^-；

毛细管电压：3.5kV；

离子源温度：110℃；

锥孔气：氮气，50L/Hr；