[发明专利]诊断癌症的试剂及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学领域；更具体地，本发明涉及诊断癌症的试剂及试剂盒。

背景技术

DNA甲基化是一种常见的表观遗传修饰，在哺乳动物中DNA甲基化主要是指胞嘧啶(C)5位上的碳被甲基化修饰成5-甲基胞嘧啶(5mC)。CpG二核苷酸是发生DNA甲基化主要的位点，它在基因组中呈不均匀分布。在一些区域，主要是基因的启动子和第一外显子区域，CpG高于正常概率，这些区段因此而被称为CpG岛。整个基因组范围内，约有60％以上基因的启动子区含有CpG岛。总体来说，在哺乳动物中5mC约占C总量的2-7％，因此而有了“第五种碱基”之称。

DNA甲基化在正常和异常的生理活动中起着重要的作用。它可以抑制基因的表达，参与对染色体的结构维持，调节X染色体失活、基因印记、和转座子沉默等重要细胞功能。

TET1，全名Ten-Eleven Translocation 1。Tet1是一个2-OG，Fe++依赖性的5mC加氧酶，可以将5mC转变为5-羟甲基胞嘧啶(5-HydroxymethylCytosine)(hmc)。同时，在大脑细胞中也发现了hmc的存在。

TET1的生物学功能仍不知道，由于Tet1是从急性骨髓状白血病患者的十号衍生染色体中克隆出来的，而且易位至十一号染色体上，估计它与癌症发生发展有关，但Tet1在癌症中的作用仍不知道。

hmc是1952年在噬菌体中发现的。1972年发现hmc也存在于哺乳动物中，它存在于小鼠和青蛙的脑DNA中，也存在于大鼠的脑和肝脏中，在脑中hmc大约占总胞嘧啶的20％，在肝脏组织里占总胞嘧啶的6％(40)。目前现有技术中，还没有发现hmc与癌症的相关性。

发明内容

本发明的目的在于提供诊断癌症的试剂及试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种5-羟甲基胞嘧啶用作检测癌症的标志物的用途。

在一个优选例中，所述的癌症包括(但不限于)：脑癌(如胶质瘤)、鳞状上皮癌(如食管癌、皮肤癌、头颈癌等)、乳腺癌、胃癌、肠癌(如结肠癌、直肠癌)、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、肺癌、肝癌、白血病、淋巴瘤、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、胸腺癌、精原细胞癌、肌肉瘤。

在本发明的另一方面，提供一种5-羟甲基胞嘧啶(hmc)的用途，用于制备检测癌症的试剂。

在另一优选例中，所述的检测癌症包括：确定癌症的严重程度或进行癌症的分型。

在另一优选例中，所述的5-羟甲基胞嘧啶与载体蛋白连接，用于制备检测癌症的试剂。

在另一优选例中，所述的载体蛋白选自：牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、血蓝蛋白(KLH)。

在本发明的另一方面，提供一种抗原，所述抗原包含载体蛋白(优选没有免疫原性的)，以及连接于载体蛋白上的一个或多个(如1-100个；更特别地如5、10、12、13、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90个)5-羟甲基胞嘧啶。

在另一优选例中，所述的载体蛋白选自：牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、血蓝蛋白(KLH)。

在本发明的另一方面，提供所述的抗原的用途，用于制备检测癌症的试剂。

在本发明的另一方面，提供一种特异性识别5-羟甲基胞嘧啶(hmc)的试剂的用途，用于制备检测癌症的试剂盒。

在另一优选例中，所述的试剂是特异性识别5-羟甲基胞嘧啶的抗体(包括多克隆抗体或单克隆抗体)。

在本发明的另一方面，提供一种多克隆抗体，其特异性地识别5-羟甲基胞嘧啶。

在另一优选例中，所述的多克隆抗体的制备方法为：用所述的抗原免疫兔子，获取免疫血清，纯化后获得所述的多克隆抗体。

在另一优选例中，所述的多克隆抗体的制备方法为：将所述的抗原与弗氏佐剂混合(较佳地1∶1混合)后，注射到家兔，免疫量0.5±0.2mg，每隔1.5-3周(较佳地2周)免疫1次，免疫2-4次(较佳地3次)，从兔血清中分离多克隆抗体。

在本发明的另一方面，提供一种单克隆抗体，其特异性识别5-羟甲基胞嘧啶，其由保藏号为CCTCC No：C201191的杂交瘤细胞株产生。

在本发明的另一方面，提供一种杂交瘤细胞株，其在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC No：C201191。

在本发明的另一方面，提供一种用于检测癌症的试剂盒，其中包括特异性识别5-羟甲基胞嘧啶的试剂。