[发明专利]一种能够降解石油的醋酸钙不动杆菌的应用

说明书

技术领域

本发明涉及利用微生物进行环境治理领域，具体地说一种能够降解石油的醋酸钙不动杆菌的应用。 

背景技术

随着社会的发展，人们对石油的需求量也不断加大，与此同时由于各种途径造成的石油污染也日趋严重。目前，石油及其炼制品在开采、炼制、贮运和使用过程中进入海洋环境而造成的污染，已经成为世界各国的一种最为严重的海洋污染。进入海洋环境的石油及其炼制品主要来自以下途径：①经流域或直接向海洋注入的各种含油的废水；②海上油船漏油事故和排放；③海底油田开采溢漏及井喷事故；④逸入大气中的石油烃沉降及海底自然溢油等。目前经由各种途径进入海洋的石油烃总量约600万吨/年，排入中国沿海的石油烃总量约10万吨/年。石油污染对海洋造成的危害主要有以下几个方面： 

1)石油中的多环芳烃类的有毒有害物质，可以直接对海洋生物产生毒性； 

2)石油形成的油膜覆盖海面，减少水气中氧气的交换和光照强度，导致水生生物饿死或者缺氧致死； 

3)石油具有较强的黏性，一旦沾染到动物体表，就难以处理并对动物产生毒害，因此，使一些海鸟和海洋脊椎动物受害； 

4)石油中含有难降解的持续有机污染物和重金属等，可在海洋环境中长期存留并通过生物体富集，危害渔业安全和人类的健康，飘到海边陆地的石油还能污染土壤。 

5)石油污染无疑加剧了近海的荒漠化，加速了某些物种的灭绝。 

微生物可以分解石油等有机污染物。石油污染物的微生物修复技术，是利用微生物的代谢将存在于环境中的石油污染物降解成二氧化碳和水或转化成为无害物质的工程技术。早在上个世纪80年代，对石油污染物的微生物修复技术就开始研究，并逐渐在实际中应用。1989年美国Exxon公司和美国环保局联合实施的微生物修复Alaska威廉王子海湾石油污染，是应用微生物进行环境中石油污染修复的一个极为成功的例子，也是现代微生物修复技术发展的开端。在石油污染物微生物修复技术中，具有石油分解能力的微生物的筛选是利用微生物技术进行石油污染物微生物修复技术研发的前提和工具。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用自身代谢能够降解石油的醋酸 钙不动杆菌及其应用。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种能够降解石油的醋酸钙不动杆菌的应用，其特征在于：所述醋酸钙不动杆菌为醋酸钙不动杆菌T32，分类学命名乙酸钙不动杆菌Acinetobacter calcoaceticus，其可作为石油的降解菌株。该菌于2010年11月06日被中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)登记保藏，编号为CGMCC No.4311，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 

所述醋酸钙不动杆菌能够利用石油作为唯一的碳源在最小培养基中生长和繁殖，能够显著降解所在环境中石油的浓度。 

所述醋酸钙不动杆菌T32，可以利用其自身的代谢过程，降低环境中石油的浓度，主要包括以下步骤： 

(1)T32种子培养：从平板上选取一环菌落接入LB培养基，摇瓶装液量为摇瓶体积的30％，培养温度为28～30℃，培养转速180～200rpm/min，培养时间为10-16h。 

(2)T32降解石油的摇瓶实验：将步骤(1)中的T32种子液按1×10⁷CFU/ml的起始浓度接种于含有石油的最小培养基中进行培养，以未接种T32种子液的含有石油的最小培养基作为未被细菌降解的石油的对照。 

(3)T32降解96孔板中的石油：称取200mg的石油溶解于2ml的有机溶剂正己烷中，配置成终浓度为100mg/ml的石油溶液。取100μl的石油溶液加入到无菌的96孔板中，放置在室温静置使正己烷全部挥发干净。将过夜培养的醋酸钙不动杆菌菌液加入到最小培养基中使菌液的终浓度达到1.0×10⁷CFU/ml。将100μl的上述菌液加入到含有石油的96孔板中，在28～30℃培养箱中培养。7天后观察降解结果，并对未经过细菌降解和经过细菌降解的石油进行紫外光吸收值和气相色谱的测定。 

步骤(2)中所述最小培养基的配方为：每升水中加入1360mg磷酸二氢钾，1780mg磷酸氢二钠，500.08mg硫酸镁，500mg氯化铵，0.1mg氢氧化铝，0.05mg二氧化锡，0.05mg碘化钾，0.05mg氯化锂，0.05mg硼酸，0.1mg硫酸锌，0.01mg氯化钴，0.01mg硫酸镍，0.05mg氯化钡和0.05mg钼酸铵，pH，7.2±0.1。