[发明专利]可持续释放的蜂毒肽帕莫酸盐及其制剂

说明书

 

技术领域

本发明涉及医药技术领域，确切地说是提供一种可持续释放的蜂毒肽帕莫酸盐及其制剂和制备方法。

 

背景技术

蜂毒肽(melittin)是蜂毒中起药理作用和生物学活性的最主要成分，约占蜂毒干重的50%。其一级结构由26个氨基酸残基组成：NH₂-Gly-Ile-Gly-Ala-Val-Leu-Lys-Val-Leu-Thr- Thr- Gly

-Leu-Pro-Ala-Leu-Ile-Ser-Trp-Ile-Lys-Arg-Lys-Arg-Gln-Gln-CONH₂，分子式C₁₃₁H₂₂₉O₃₁，分子量2840 Da。其中第1位至第20位的氨基酸是疏水基团，第21位至第26位的氨基酸是亲水基团；N末端的2个氨基酸和C末端的4个氨基酸均带正电，分子中三个赖氨酸和两个精氨酸残基的存在使蜂毒肽为强碱性肽，其等电点为12.06。

蜂毒肽能刺激垂体肾上腺系统使皮质激素释放增加而产生抗炎作用，是迄今为止人类所知的抗炎活性最强的物质之一, 其抗炎活性是氢化可的松的100 倍，并可以抑制20 多种革兰氏阴性和阳性细菌的生长繁殖，尤其是抵抗对青霉素具有耐药性的金黄色葡萄球菌。同时蜂毒肽具有显著的镇痛作用，其对前列腺素合成酶的抑制作用是吲哚镁辛的70倍，镇痛强度为吗啡的40%，能够提高疼痛阈、延长镇痛作用的持续时间，并且无水杨酸类对消化道的刺激和甾体类的免疫抑制作用。另外，蜂毒肽可对多种肿瘤有直接杀伤作用，在体外1μmol浓度的蜂毒肽即可阻止肿瘤细胞的增生，而不抑制正常细胞的生长和克隆率。与蓖麻毒蛋白、白喉毒蛋白等大分子毒蛋白相比，蜂毒肽免疫原性低，不易产生过敏反应。 

由于蜂毒肽具有显著的抗炎、镇痛及抗肿瘤作用，目前关于蜂毒肽的基础和临床研究相当活跃，但临床应用仍非常有限，主要原因是此类药物体内代谢具有明显的半衰期短、清除率高的特征，临床应用时要达到需要的血药浓度和治疗效果需要大剂量反复用药。如目前蜂毒注射液在治疗关节炎中的通行临床给药方案一般为每日一次关节腔内注射，连续20～30天一个疗程，需反复应用几个疗程。长期频繁注射给药所造成的肌体损伤及精神、经济压力往往令患者难以承受，由于顺应性差而极易导致治疗中途的失败。

CN03110871.7公开了一种蜂毒可生物降解微球注射剂及其制备方法，采用复乳-液中干燥法直接将溶液型蜂毒肽包裹入聚乳酸类生物可降解聚合物中，药物可持续释放四周。这是传统的包裹水溶性药物的方法，制备工艺中涉及的有机溶剂和高剪切力对溶液型游离多肽的生物活性会产生很大影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种可持续释放的盐型蜂毒肽，它能克服普通游离型蜂毒肽半衰期短、需要频繁注射以及现有微球制备工艺中涉及的有机溶剂和高剪切力等缺陷，经皮下或肌肉注射后可持续释放药物2～4周。

本发明提供的蜂毒肽帕莫酸盐，具有如下结构通式：

式中，n=0.5～6。优选n=1～3。

本发明提供的制备上述蜂毒肽帕莫酸盐的方法包括如下步骤：

（1）将帕莫酸混悬在注射用水中，搅拌下加入氢氧化钠溶液至帕莫酸完全溶解，制成帕莫酸钠盐。所述原料摩尔比为：帕莫酸1份，氢氧化钠2份。

（2）将蜂毒肽溶于注射用水中，搅拌下加入帕莫酸钠盐溶液，至结晶析出。所述原料摩尔比为：蜂毒肽1份，帕莫酸钠盐0.5～6份。

（3）将结晶沉淀过滤分离，用注射用水洗涤干燥。

本发明的另一个目的在于提供蜂毒肽帕莫酸盐的制剂。本发明的蜂毒肽帕莫酸盐可与药学上可接受的辅料制成注射用混悬剂、油溶液或注射用无菌粉末。其中，优选注射用无菌粉末。

溶液型的游离蜂毒肽血浆半衰期短，且理化性质不稳定，在生理pH条件下（pH7.4）极其不稳定，用于风湿性关节炎、肩周炎等治疗需要每天频繁注射。而本发明的蜂毒肽与帕莫酸成盐后具有意想不到的缓释效果，根据治疗需要可持续释放有效成分1～4周。

 

附图说明

图1为实施例3、4、5、6所制得的蜂毒肽帕莫酸盐的累积溶出曲线。

图2为实施例8（注射用蜂毒肽帕莫酸盐无菌冻干粉）和对照例（溶液型蜂毒肽）的平均血药浓度-时间曲线。

 

具体实施方式

实施例1  蜂毒肽的分离纯化