[发明专利]高产β-半乳糖苷酶的酵母菌株及其应用

权利要求书

1.高产β-半乳糖苷酶的脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)菌株BLB-22，该菌株2011年9月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，菌种保藏编号为CGMCC No.5293。

2.权利要求1所述脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)菌株BLB-22在制备β-半乳糖苷酶中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤如下：

(1)取脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)菌株BLB-22接种至斜面培养基，在温度28-30℃培养14-38小时，然后用生理盐水将菌种从斜面培养基洗下，得菌液；

(2)将步骤(1)制得的菌液接种至种子培养基，在温度28-30℃、压力0.05-0.15MPa、溶解氧饱和度2％-40％的条件下，培养时间10-38h，得种子液；

(3)将步骤(2)制得的种子液接种至发酵培养基，在28-30℃、压力0.03-0.15MPa，溶氧量1％-40％的条件下，培养时间10-40h，得发酵液；

(4)将步骤(3)制得的发酵液分离菌体后，破碎菌体，然后用截留分子量为50,000-300,000Da的卷式超滤膜过滤，取滤液即为β-半乳糖苷酶酶液。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中的斜面培养基组分如下：

酵母膏1-15g/L，蛋白胨1-30g/L，葡萄糖10-40g/L，磷酸氢二钠0.5-2g/L，琼脂20g/L，pH 5.0-7.0。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(2)中的种子培养基组分如下：

酵母膏1-15g/L，蛋白胨1-30g/L，葡萄糖10-40g/L，磷酸氢二钠0.5-2g/L，pH 5.0-7.0。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(3)中的发酵培养基组分如下：

酵母膏1-15g/L，蛋白胨1-30g/L，乳糖10-40g/L，pH 5.0-7.0。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(4)中的分离菌体，发酵液在离心力2000g-8000g的条件下离心，取沉淀，0.01-0.5M磷酸盐缓冲液悬浮，即得。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(4)中的破碎菌体是指在均质压力30MPa-100MPa的条件下，经均质机破碎获得；或者，在冰水浴、400-750W的条件下，超声波处理；优选的，上述超声波处理，步骤为超声波处理3-4s、停止超声波处理10-12s，重复该处理步骤15-25次。

9.权利要求1所述脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)菌株BLB-22在制备低聚半乳糖中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，步骤如下：

(1)将权利要求3制得的β-半乳糖苷酶酶液加入至浓度为200-550g/L乳糖溶液中，β-半乳糖苷酶的加入量为每克乳糖添加5-40U，pH 5.0-7.5，得混合液；

(2)将步骤(1)制得的混合液在30-50℃的条件下，反应20-45h，得低聚半乳糖粗液；

(3)将步骤(2)制得的低聚半乳糖粗液经灭酶活、脱色过滤、离交、浓缩，得低聚半乳糖。