[发明专利]抗乙型脑炎病毒的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物领域，涉及抗乙型脑炎病毒的单克隆抗体及其应用。

背景技术

乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)，属于黄病毒科黄病毒属，有包膜的单股正链RNA病毒，结构蛋白有3种：C、M和E，分为4个基因型(I、II、III、IV型)。三带喙库蚊为主要传播媒介，主要在亚洲流行，我国主要流行基因I型和III型，是危害我国人民生命及畜牧业的最重要的虫媒病毒之一，可引起严重的神经系统症状，致死率高达30％左右，另有50％的患者会留下永久性的神经系统后遗症。据统计，亚洲每年乙脑发病人数达16000例左右，死亡5000例左右，中国除新疆、西藏、青海外，其它各省均有发病与流行，脑炎发病数占世界总发病数的80％以上。近年来，该病的流行区域在不断扩大，成为严重的公共卫生问题。加强监测和诊断是十分重要的。

目前，乙脑诊断方法主要有血清学诊断、分离培养和分子生物学方法。

1、血清学检测：

传统的血清学方法有血凝抑制试验(HI)、补体结合试验(CT)、中和试验(NT)等。目前主要应用的有酶联免疫法(ELISA)，免疫荧光(IFA)、滴金免疫法。血凝抑制试验、补体结合试验、中和试验是流行病学调查常用的传统方法，需要采集急性期和恢复期双份血清进行检测，诊断费时费力，不能达到早期快速诊断的目的，特异性和敏感性不高，双份标本的采集有困难；酶联免疫包被技术、酶标记技术、单克隆抗体技术的发展推动了ELISA检测乙脑IgM的应用和发展。现应用于诊断乙脑IgM的ELISA方法有捕获法和间接法；免疫荧光技术操作比较复杂，需要专业的人员及设备，而滴金免疫法则由于其简单，快速，有望推广生产使用。

2、分离培养：

主要有乳鼠脑组织接种和BHK、Vero等细胞分离，是获得毒株进行分子流行病学研究和疫苗株构建的基础。通过分离培养取得毒株，进行分子生物学等鉴定，可研究其基因型、是否本地区主要流行株或外来输入株、是否发生变异等。

3、分子生物学检测

由于黄病毒间存在广泛的血清学交叉反应，发病早期部分患者还未产生抗体，使乙脑血清学诊断不能达到满意效果；乙脑患者毒血症期很短，病毒分离培养时间长，阳性率低RT-PCR技术的产生给病毒检测提供了早期、快速、敏感、特异的方法。JEV全基因序列测定取得的进展、分子生物学及生物信息学的发展，为乙脑的快速基因检测提供了可能。主要的检测方法有PCR-ELISA微板杂交法、RT-PCR、套式PCR、半套式PCR、实时荧光PCR和基因芯片。

自1975年，Kohler和Milstein创立了杂交瘤技术。单克隆抗体制备技术因其很强的特异性和专一性，尤其是单抗的人源化技术的发展，广泛地运用于生物学及医学的各个领域。在乙型脑炎病毒的检测中，杂交瘤细胞技术和单克隆抗体技术在ELISA、中和试验、免疫荧光、免疫胶体金试剂盒、噬菌体展示技术等方面起到了举足轻重的作用。中和性的单克隆抗体则在疫苗及检测试剂盒的开发研制方面具有巨大的潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一种分泌抗JEV的单克隆抗体的杂交瘤。

本发明的另一目的是提供抗JEV的单克隆抗体。

本发明的又一目的是提供该单克隆抗体的应用。

分泌抗乙脑病毒的单克隆抗体的杂交瘤细胞株2B4，2011年8月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.5124。

一种抗乙脑病毒的单克隆抗体，由所述的保藏号为CGMCC No.5124的杂交瘤细胞株2B4产生。

所述的单克隆抗体在制备检测乙脑病毒的检测试剂中的应用。所述的单克隆抗体在体外抗原抗体反应中用于检测病原、病毒蛋白以及宿主细胞和动物实验中的中和作用。例如用于酶联免疫吸附实验(ELISA)、蛋白质印迹(Western Blot)、间接免疫荧光(Indirect Immunofluorescence)、细胞及动物的中和实验以及流式细胞术(Flow Cytometry Assay)等的检测中，以检测其与抗原的结合性、特异性以及是否具有中和活性。

本发明制得的抗JEV的单克隆抗体，为JEV的研究和建立新的乙脑病毒检测方法以及相关的诊断试剂盒和疫苗提供了有利的工具。

有益效果：