[发明专利]抗人血小板膜糖蛋白Ibα嵌合抗体药物组合物

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术嵌合抗体领域，具体的说是抗人血小板膜糖蛋白Ibα嵌合抗体药物组合物。

背景技术

血小板GPIbα是一种血小板特异性膜糖蛋白，以GPIb-IX-V复合物的形式存在，该复合物包含四个亚单位，GPIbα，GPIbβ，GPIX和GPV，以2∶4∶2∶1的比例组成。它们都是I型跨膜糖蛋白，包括胞外区，跨膜区和胞浆区。GPIbα与GPIbβ之间以二硫键的形式共价连接组成GPIb，GPIb与GPIX，GPV以非共价键的形式连接形成GPIb-IX-V复合物。GPIbα是该复合物中主要的配体结合亚单位。当血管受损时，血小板膜表面受体GPIbα在高剪切力条件下与血浆VWFA1结构域结合，同时VWF的A3结构域与血管损伤部位暴露的内皮下基质主要是胶原结合，从而在VWF的桥联作用下实现血小板的初始黏附。此外，VWF结合GPIbα后引发一系列血小板细胞内信号传递，最终使血小板整合素受体GPIIb/IIIa活化，引起血小板聚集，形成血栓。而动脉血栓引起的中风、心肌梗死等血栓栓塞性疾病是我国最常见的死亡病因之一，且其发病率仍在不断上升。目前临床应用的阿司匹林和氯噼格雷是第一代抗血小板药物，GPIIb/IIIa抑制剂为第二代抗血小板药物。虽然这些药物对于改善动脉血栓引起的血栓栓塞性疾病有着巨大的贡献，但是，仍然有相当一部分病人用了这类药物之后不能改善缺血性症状。另外，潜在的出血并发症也限制了这些药物的应用。血小板黏附是动脉血栓形成的早期必经阶段，阻断GPIbα与VWF的结合，抑制血小板的初始黏附，被认为能够有效抑制血栓形成，并且能够降低出血倾向。Deckmyn等报道在狒狒股动脉狭窄血栓模型的体内实验中应用抗血小板GPIbα单克隆抗体6B4-Fab剂量为0.6mg/kg时可以明显减少单位时间内周期性血流减低发生的次数，还明显抑制血小板在I型胶原上的沉积(700-1000/s)。2mg/kg的6B4-Fab可以完全抑制周期性血流减低的发生，而无出血时间的延长。因此，抗GPIbα单克隆抗体具有良好的抗血栓应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种人源化的抗血小板GPIbα单克隆抗体药物组合物。

本发明提供的抗人血小板膜糖蛋白Ibα嵌合抗体药物组合物，包括嵌合抗体成熟轻链和嵌合抗体成熟重链，所述嵌合抗体成熟轻链的氨基酸序列为序列表中序列2的自氨基末端第453～666位氨基酸残基，所述嵌合抗体成熟重链的氨基酸序列为序列表中序列2的自氨基末端第1～452位氨基酸残基。

本发明还提供抗人血小板膜糖蛋白Ibα嵌合抗体药物组合物，其特征在于所述药物组合物含有药学上有效量的上述嵌合抗体成熟轻链和嵌合抗体成熟重链以及药学上可接受的载体。

本发明还提供了抗人血小板膜糖蛋白Ibα嵌合抗体药物组合物的氨基酸的编码基因，其特征在于所述编码基因为序列表中的序列1。

附图说明

附图是本发明嵌合抗体及其Fab片段体外抑制瑞斯托霉素诱导的血小板聚集分析图。其中：

(A)中(f)富血小板血浆与10μg/ml chSZ2；(g)富血小板血浆与10μg/ml鼠源SZ2；(h)富血小板血浆与10μg/ml人IgG；

(B)中chSZ2Fab呈剂量依赖型抑制瑞斯托霉素诱导的血小板聚集(a至e代表0.5，1，2，5，10μg/ml chSZ2Fab片段)。

具体实施方式

下面结合附图，对本发明作进一步说明。

实施例1，抗人血小板膜糖蛋白Ibα嵌合抗体的获得：

一、引物设计和合成，

实验中所涉及的引物除了试剂盒提供的以外，均为Invitrogen公司合成。