[发明专利]无动物源冻精稀释液

说明书

技术领域：

本发明涉及一种制作牛、羊冻精时使用的用无动物来源成份配制的冻精稀释液。

背景技术：

目前，在制作牛、羊冻精时，需用稀释液对精液进行稀释，而目前使用的冻精稀释液，都含有动物来源成份(含有卵黄、奶类等)，用其制作的冻精解冻后精子活力低，存活时间短，细管冻精的顶体完整率低，病源微生物数量多。在原精活力为70％的前提下，冻精解冻后精子活力在30～50％，平均活力只有45％，在38℃的平均存活时间为4～7小时，解冻后细管冻精的顶体完整率平均在65％以下，24小时培养后病源微生物的数量平均在600～1200个菌落数。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是提供一种无动物源冻精稀释液，用该稀释液制作的冻精解冻后精子活力高，存活时间长，细管冻精的顶体完整率高，病源微生物数量少。

上述目的是这样实现的：所述的无动物源冻精稀释液由下列成份按如下质量比配制而成：乳糖3.412克，蔗糖0.5克，葡萄糖0.9克，海藻糖0.61克，柠檬酸0.53克，乙二酸四乙胺0.403克，三羥甲基氨基甲烷1.425克，柠檬酸三钠0.375克，乙二醇5.2毫升，双蒸水100毫升，粉沫磷脂0.88克。

具体配制方法如下：将所述的乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、柠檬酸、乙二酸四乙胺、三羥甲基氨基甲烷、柠檬酸三钠、乙二醇、放入三角烧瓶内，加入双蒸水，加热至95℃，使上述药品完全溶解，降温至35℃时，加入粉沫磷脂，搅拌30分钟，再降温至4℃，并在4℃环境中静置存放12小时，用滤纸滤除溶液中的沉淀物，即可使用。

本发明的优点是：用该稀释液制作的冻精解冻后精子活力高，存活时间长，细管冻精的顶体完整率高，病源微生物数量少。在原精活力为70％的前提下，平均解冻后活力在58％以上，最高解冻活力达68％，解冻后在38℃环境中存活时间平均在11个小时以上，最长存活时间超过24小时，解冻后细管冻精的平均顶体完整率在72.8％以上，解冻后的冻精经48小时培养，病源微生物菌落数少于130个，如果采精时保证原精和操作过程中无病源微生物污染，则制作的细管冻精经培养后就不会有病源微生物存在；应用此稀释液所制冻精，可以避免因稀释液带有病源微生物而在牛羊之间、牛羊与人之间相互传播，从而有效降低了人畜共患疫病的风险。

具体实施方式：

所述的无动物源冻精稀释液由下列成份按如下质量比配制而成：乳糖3.412克，蔗糖0.5克，葡萄糖0.9克，海藻糖0.61克，柠檬酸0.53克，乙二酸四乙胺0.403克，三羥甲基氨基甲烷1.425克，柠檬酸三钠0.375克，乙二醇5.2毫升，双蒸水100毫升，粉沫磷脂0.88克；

具体配制方法如下：将所述的乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、柠檬酸、乙二酸四乙胺、三羥甲基氨基甲烷、柠檬酸三钠、乙二醇、放入三角烧瓶内，加入双蒸水，加热至95℃，使上述药品完全溶解，降温至35℃时，加入粉沫磷脂，搅拌30分钟，再降温至4℃，并在4℃环境中静置存放12小时，用滤纸滤除溶液中的沉淀物，即可使用。

其中乳糖、蔗糖、葡萄糖、海藻糖、柠檬酸、乙二酸四乙胺、三羥甲基氨基甲烷、柠檬酸三钠、乙二醇均为化学分析纯试剂，双蒸水的PH值为6.9。

其中粉沫磷脂是指由北京华清美恒公司生产的大豆卵磷脂，具体指标如下：产品型号为PLW，外观形态为浅黄色粉沫，水份及挥发物≤1.0％，丙酮不溶物≥98％，乙醚不溶物≤0.1％，酸价(mgKOH/g)≤35，过氧化值≤12。

其中柠檬酸三钠是含有两个结晶水的柠檬酸三钠。

用该无动物源冻精稀释液制作冻精的方法：

1.精液稀释：

在使用前，将配制好的无动物源冻精稀释液水浴加温至35℃，再将采集的精液与无动物源冻精稀释液按1∶2～1∶15进行稀释。

2.降温平衡：

将稀释好的精液以每分钟约0.5℃的速度降温至0～5℃，存放0.5小时，然后在此温度下进行灌装。

3.冷冻：

将灌装好的细管冻精放置于-95±5℃的温度下进行冷冻，3分钟后经检测合格投入液氮中保存。

4.细管冻精解冻：

从液氮中取出细管冻精，迅速投入到38～40℃的温水中，使水面浸没冻精细管，至细管冻精刚变为透明时取出，在200～600倍的显微镜下观察。用该无动物源冻精稀释液制作细管冻精解冻后的配种效果：

牛羊在排卵期采用子宫颈口输精法配种，一个情期输精2次，间隔12小时，受胎效果为：牛平均为97％以上，羊为76％以上。牛的受胎率比用含有动物来源的稀释液所制冻精配种的受胎率平均提高5～7％，羊的受胎率比用含有动物来源的稀释液所制冻精配种的受胎率平均提高10～16％。