[发明专利]大麦籽粒中酚酸类化合物的定量测定方法

权利要求书

1.一种大麦籽粒中酚酸类化合物的定量测定方法，其特征在于主要测定方法步骤如下：

一、样品预处理

大麦籽粒烘干，粉碎，精确称取一定量粉碎后的大麦粉，按液固比40:1~60:1加入浓度为40~95%用0.2NHCl调节PH值至4.2的甲醇水溶液，并加入重量为大麦粉样品重量的1/10~1/20抗坏血酸作为抗氧化剂，在超声频率25~85KHz、超声功率300~600W、50~75℃条件下提取30~50min，然后迅速冰浴以终止酸解，4000~5000g离心，上清液旋转蒸发至近干，残余物用甲醇溶解，15000~18000g离心，上清液于棕色容量瓶中定容，进样前用微孔滤膜过滤；

二、色谱条件：

（1）色谱柱：以高纯硅胶为填充剂的反相C18色谱柱；

（2）检测器：紫外检测器；

（3）检测波长：270-280nm；

（4）流动相：采用甲醇－甲酸水溶液做为流动相，流动相A为100%甲醇，流动相B为浓度0.1%-2%甲酸水溶液，HPLC分析前经真空脱气，采用梯度洗脱，洗脱程序为0-20min，25%-50%B；20-22min，50%-25%B；22-27min，25%B；

（5）流速：0.6~0.8mL/min；

（6）柱温：40~50℃；

三、浓度计算方法

用酚酸类化合物标准品，包括没食子酸、原儿茶酸、绿原酸、对羟基苯甲酸、咖啡酸、香草酸、丁香酸、间羟基苯甲酸、对香豆酸、阿魏酸、藜芦酸、邻香豆酸和水杨酸等13种配制成一定梯度浓度的混合标准溶液，取5~20μl进样，按外标法，以峰面积-浓度做线性回归，得出线性回归方程，利用该方程和测得的样品提取液中酚酸类化合物的峰面积计算样品提取液中酚酸类化合物的浓度；

四、样品检测

（1）按照1中的方法进行样品预处理，取处理好的样品提取液5~20μl进样；

（2）按照2中的色谱条件进行检测，分别得到样品提取液和混合标准品的色谱图，将样品提取液色谱图和同一批次检测的混合标准品色谱图进行比较，样品提取液色谱图中与标准品保留时间相近误差范围：标准品保留时间±0.5min的色谱峰即为相应的酚酸类化合物成分；

（3）将样品提取液中酚酸类化合物各成分的色谱峰面积代入3中的线性回归方程中，计算样品提取液中酚酸类化合物各成分的浓度；

五、大麦籽粒样品中酚酸类化合物成分含量的计算

通过以下公式计算大麦籽粒样品中酚酸类化合物成分的含量：

式中：

W—大麦籽粒样品中酚酸类化合物成分的含量，mg/kg；

C—样品提取液中酚酸类化合物成分的浓度，mg/mL；

V—样品提取液的最终定容体积，mL；

m—大麦籽粒样品重量，g。

2.如权利要求1所述的大麦籽粒中酚酸类化合物的定量测定方法，其特征在于所述的样品预处理中所用的超声频率为45~50KHz。

3.如权利要求1或2所述的大麦籽粒中酚酸类化合物的定量测定方法，其特征在于所述的样品预处理中所用的超声功率为500~550W。