[发明专利]游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)定量测定试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及测定血清的试剂盒及其测试方法，尤其是涉及测定血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)含量的试剂盒及其测试方法。

背景技术

三碘甲腺原氨酸(3，5，3’-三碘甲腺原氨酸，T3)是一种分子量为651的碘化酪氨酸，是一种重要的甲状腺激素。游离三碘甲腺原氨酸(Free Tri-iodothyronine，简称FT3)是一种未与甲状腺结合球蛋白(TBG)等传输蛋白结合的三碘甲状腺原氨酸(T3)，FT3具有代谢活性。FT3进入靶细胞发挥作用，它是反映甲状腺功能最确切的指标之一。FT3在外周血中含量很低，它通过细胞膜进入细胞与受体结合发挥生理效应，因此它是甲状腺激素发生生理效应的真正活性部分，能比较确切地反应甲状腺的功能状态及其它对人体机能的影响。测定血清中FT3含量，是甲状腺功能亢进与低下，以及亚临床型甲状腺功能亢进的诊断与鉴别诊断最灵敏的指标之一。FT3是诊断甲状腺功能亢进最直接的指标，大多数甲亢患者FT3、FT4都会升高，不过在某些病例中，甲状腺功能亢进仅仅是由于T3的含量升高而引起(T3型甲亢)。严重甲状腺功能低下患者的FT3水平通常偏低而轻度甲功低下患者FT3可能正常。通常情况下，FT3与TT3测定是一致的，但当甲状腺结合蛋白异常，如上文所述的情况，二者的结果就会不一致，此时FT3比T3更能反应甲状腺功能。因此，一般认为FT3是诊断甲亢的灵敏指标。此外，测定血清FT3又可以作为判断疗效的可靠指标。目前临床上用于测定FT3的方法主要有放免法、ELISA法、化学发光法等。

磁微粒分离酶联免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体，将免疫磁微粒分离技术与酶联免疫检测技术相结合而建立的一种新型免疫检测方法。传统ELISA方法，抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，而磁微粒分离酶联免疫检测方法，抗原、抗体的结合反应也在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。与传统ELISA相比具有灵敏度高，检测用时少的优点。

发明内容

本发明需要解决的技术问题在于提供一种游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)定量测定试剂盒及其检测方法，采用该试剂盒进行FT3检测具有较高的灵敏度和特异性，和更短的获得检测结果的时间和更简便的操作方式。

本发明提供了一种游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)的定量测定试剂盒，其包含的试剂有FT3磁分离试剂，酶反应物，反应增强剂，稀释液，校准品、质控品，清洗液浓缩液以及底物溶液。

所述的磁分离试剂含有标记有抗FT3单克隆抗体的磁性微球。

所述的酶反应物是含有碱性磷酸酶标记的FT3抗原。

所述的反应增强剂是含有Tris的缓冲液。

所述稀释液是含有BSA溶液。

所述的校准品及质控品是含有一定量的FT3抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液浓缩液是含有TWEEN-20和Proclin-300的缓冲液。

所述的底物溶液为酶促化学发光底物溶液。

本发明游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)的定量测定试剂盒的制备方法，包括下述步骤：

第一步：磁分离试剂的制备过程

一、磁珠缓冲液配制操作步骤，配制1L：

1、称取TRIS 4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96g TWEEN-20于20ml容器中加适量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌；

3、调节PH计测量其PH值，调PH，控制PH在7.95-8.05之间；

4、称取BSA 3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um滤器过滤；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存。

二、磁分离试剂的制备过程

1、将1.0mg辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg抗FT3单克隆抗体溶于PH 9.5的0.1mol/L PB缓冲液中至总体积为1ml；

2、确定辛二酸二琥珀酰亚胺酯的投入量，用移液枪吸取辛二酸二琥珀酰亚胺酯加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；

3、将步骤2抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中然后放入到高速冷冻离心机中在3000g下浓缩30min至体积为0.5ml；