[发明专利]HLA-A*1101限制的WT1肽及含有其的药物组合物

说明书

本申请是国际申请日为2007年12月14日的国际申请PCT/JP2007/074146进入中国、申请号为200780048749.1的题为“HLA-A^*1101限制的WT1肽及含有其的药物组合物”的发明专利申请的分案申请。 

技术领域

本发明涉及HLA-A^*1101限制的WT1肽，具体而言为含有由WT1蛋白质9个邻接氨基酸组成的氨基酸序列的肽，其中该肽具有结合HLA-A^*1101分子的能力，并且具有诱导CTL的能力。本发明也涉及具有结合HLA-A^*1101分子的能力并且具有诱导CTL的能力的肽二聚体，其中两个肽单体通过二硫键彼此结合，所述肽单体各自含有由WT1蛋白质9个邻接氨基酸组成并且含有至少一个半胱氨酸残基的氨基酸序列。此外，本发明涉及编码该肽的多核苷酸、含有其的用于治疗和/或预防癌症的药物组合物等。 

背景技术

WT1基因(Wilms氏肿瘤1基因)被鉴定为负责儿童肾癌Wilms肿瘤的基因(非专利文件1和2)。WT1是具有锌指结构的转录因子。最初，认为WT1基因是肿瘤抑制基因。然而，后来的研究(非专利文件3、4、5和6)显示WT1基因相反在造血肿瘤和实体癌中起到癌基因的功能。 

WT1基因在许多类型的恶性肿瘤中高水平表达。于是，已检查无突变的WT1基因产物(其是自身蛋白质)是否在活体中具有免疫原性。结果揭示，在肿瘤细胞中高水平表达的衍生自WT1基因的蛋白质通过细胞内加工进行片段化，产生的肽与MHC I类分子形成复合物，且该复合物被呈递在细胞表面，而识别这种复合物的CTL可以通过肽接种诱导(非专利文件7、8和9)。在以WT1肽或WT1 cDNA免疫的小鼠中也显示，表达WT1基因的移植的肿瘤细胞以高概率被排斥(非专利文件7和10)，然而生理上表达WT1基因的正常组织没有被所诱导的CTL损伤(非专利文件7)。使用人细胞的体外实验显示，当使用Db126肽或WH187肽(SEQ ID No：1的氨基酸187-195，SLGEQQYSV)刺激具有HLA-A^*0201的人外周血单核细胞时，WT1特异性CTL得到诱导，而诱导的CTL对内源性高水平表达WT1基因的肿瘤细胞具有特异的细胞毒活性，且这种CTL的细胞毒活性是HLA-A2限制的(非专利文件11)，其中所述Db 126肽或WH187肽具有结合人MHC I类分子之一HLA-A^*0201分子的高能力。使用与HLA-A^*2402(最常见于日本人HLA-A等位基因)匹配的WT1肽(WT1235；SEQ ID No：1的氨基酸235-243，CMTWNQMNL)的人细胞体外实验显示，WT1特异性CTL(TAK-1)得到诱导(非专利文件12)，而诱导的CTL不抑制正常造血干细胞的集落形成活性，所述正常造血干细胞部分生理上表达WT1基因(非专利文件12和13)。这些报告强烈提示，WT1特异性CTL不仅在小鼠而且在人类中是可诱导的，这种CTL对以高水平表达WT1基因的肿瘤细胞具有细胞毒活性，但是对生理上表达WT1基因的正常细胞不具有细胞毒活性(非专利文件7、10、11、12和13)。 

WT1基因产物作为核蛋白存在，并在细胞质中由蛋白酶体加工以片段化为肽。片段化的肽由TAP(抗原肽转运体)分子转运到内质网腔中，与MHC I类分子形成复合物，并且呈递在细胞表面上。作为CTL前体细胞经TCR识别WT1肽-MHC I类分子复合物的结果，WT1特异性CTL得到诱导，从而对通过MHC I类分子呈递WT 1基因产物的肿瘤细胞施加细胞毒作用(非专利文件7、8和9)。于是，至少要求用于靶向WT1基因产物的癌症免疫治疗中的WT 1肽是在活体中与MHC I类分子结合的形式。然而，MHC I类分子是多样的，与各自MHC I类分子结合的WT 1肽的氨基酸序列彼此不同。因此，要求提供与MHC I类各亚型匹配的肽。然而，迄今为止仅仅已知HLA-A^*2402分子、HLA-A^*0201分子、HLA-A^*2601分子和HLA-A^*3303分子限制的肽是HLA分子限制的WT 1肽(分别见专利文件1、非专利文件11、专利文件2和专利文件3)。因此，需要发现HLA-A^*1101限制的WT1肽。 

专利文件1：WO 2003/106682 

专利文件2：WO 2005/095598