[发明专利]糖类抗原125(CA125)定量测定试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及测定血清的试剂盒及其测试方法，尤其是涉及测定血清中糖类抗原125(CA125)含量的试剂盒及其测试方法。

背景技术

CA125是一种相对分子质量为200kD的糖蛋白，普遍分布于胸膜、心包、腹膜、子宫内膜、生殖道和羊膜等间皮组织细胞表面。当这些部位发生恶性变或受到炎症刺激时，血清中CA125的水平将显著升高。CA125作为卵巢癌的主要标志用于卵巢癌疗效和复查监测。大多数卵巢癌患者的CA125浓度会呈现一种持续性升高趋势，可以作为患者疾病进展、预后和检验化疗疗效的标志物。在消化道恶性肿瘤(如胰腺癌、肝癌、胃癌、肠癌)以及一些良性肝脏病、肺腺癌、盆腔炎性病变、子宫内膜异位症时，血清CA 125水平亦可升高。在卵巢良性囊腺瘤和恶性囊性上皮瘤的穿刺液中，CA125水平可明显升高。因此CA125不能作为卵巢癌单一的检测指标。对早期卵巢癌，该检测常与其他检查如经阴道超声和经直肠阴道的盆腔检查一起进行来提高诊断的准确性。另外，与其他肿瘤标志物共同检测或进行连续检测也可以降低诊断的假阳性结果。该检测对预测卵巢癌患者的治疗效果也很有价值，化疗期间若CA125降低则表明化疗有效，若治疗后持续阳性则往往预示肿瘤的复发。目前临床上用于测定CEA的方法主要有放免法、ELISA法、化学发光法等。

过去以放免为代表的糖类抗原125(CA125)测定试剂盒受方法学的限制，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场，目前应用较多的为酶联免疫检测技术和化学发光技术。化学发光技术兴起于上个世纪80年代是继酶联免疫技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定，无放射性同位素损伤和污染等特点，在近些年得到了飞速发展。

磁微粒分离酶联免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体，将免疫磁微粒分离技术与酶联免疫检测技术相结合而建立的一种新型免疫检测方法。传统ELISA方法，抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，而磁微粒分离酶联免疫检测方法，抗原、抗体的结合反应也在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。与传统ELISA相比具有灵敏度高，检测用时少的优点。

发明内容

本发明需要解决的技术问题在于提供一种糖类抗原125(CA125)定量测定试剂盒及其检测方法，采用该试剂盒进行CA125检测具有较高的灵敏度和特异性，和更短的获得检测结果的时间和更简便的操作方式。

本发明提供了一种糖类抗原125(CA125)的定量测定试剂盒，其包含的试剂有CA125磁分离试剂，酶反应物，反应增强剂，稀释液，标准品、质控品，清洗液浓缩液以及底物溶液。

所述的磁分离试剂含有标记有抗CA125单克隆抗体的磁性微球。

所述的酶反应物是含有碱性磷酸酶标记的抗CA125单克隆抗体。

所述的反应增强剂是含有Tris的缓冲液。

所述稀释液是含有BSA溶液。

所述的标准品及质控品是含有一定量的CA125抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液浓缩液是含有TWEEN-20和Proclin-300的缓冲液。

所述的底物溶液为酶促化学发光底物溶液。

本发明糖类抗原125(CA125)的定量测定试剂盒的制备方法，包括下述步骤：

第一步：磁分离试剂的制备过程

一、磁珠缓冲液配制操作步骤，配制1L：

1、称取TRIS 4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96g TWEEN-20于20ml容器中加适量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌；

3、调节PH计测量其PH值，调PH，控制PH在7.95-8.05之间；

4、称取BSA 3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um滤器过滤；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存。

二、磁分离试剂的制备过程

1、将1.0mg辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg抗CA125单克隆抗体溶于PH 9.5的0.1mol/L PB缓冲液中至总体积为1ml；

2、确定辛二酸二琥珀酰亚胺酯的投入量，用移液枪吸取辛二酸二琥珀酰亚胺酯加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；