[发明专利]一种鸭黄病毒及其灭活疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及一种鸭黄病毒及其灭活疫苗，属于兽医传染病学领域。

背景技术

自2010年4月初以来，我国江苏、浙江、山东、福建等省的种鸭、蛋鸭发生一种以采食量迅速下降、产蛋率急速下降、甚至停产及不同程度死亡为特征的疫病，俗称种（蛋）鸭产蛋骤降、鸭出血性卵巢炎（duck hemorrhagic ovaritis,DHO）。各品种蛋鸭、樱桃谷种鸭和台湾白改种鸭均有发生，但主要见于开产蛋鸭。产蛋率高的鸭群患病后4~5天左右从产蛋高峰或高产蛋率迅速下降至20%~30%，严重的于发病后7天左右停产；刚开产种（蛋）鸭产蛋率上升缓慢或减蛋，长时间低产蛋率或无产蛋高峰出现。不同地区、不同品种鸭群发病率高低不一，群内发病率几乎100%，病死率为0~12%。我们从表现产蛋骤降的病死种鸭中以番鸭胚分离到病毒，并初步明确其为黄病毒科黄病毒属的一个新成员，命名为新型鸭黄病毒、鸭出血性卵巢炎病毒或鸭产蛋骤降病毒。目前国内外尚无防治该病的疫苗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸭黄病毒及其灭活疫苗，该疫苗能够有效控制该新型鸭黄病毒，使目前我国大量养鸭生产者减少损失、提高养殖效益。

本发明的鸭黄病毒为鸭黄病毒（Duck flavivirus）WR株，已于2011年5月30日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其简称CGMCC，保藏登记号为CGMCC NO.4906。

所述鸭黄病毒WR株的分离如下：

（1）病毒的分离培养：从表现产蛋异常的病死种鸭中无菌采集其卵巢组织，按常规方法匀浆、反复冻融4次，4℃条件下12 000 r/min离心10 min，无菌条件下吸取上清液，冻存备用；

（2）病原禽胚分离培养：将步骤（1）分离的毒株经番鸭胚连续传5代，得到的番鸭胚适应毒株即为所述鸭黄病毒WR株。

本发明还提供了一种鸭黄病毒在制备鸭黄病毒灭活疫苗中的应用。

本发明的鸭黄病毒灭活疫苗，其活性成分为灭活的鸭黄病毒WR株。

本发明的鸭黄病毒灭活疫苗的的制备方法，是将鸭黄病毒WR株接种番鸭胚，收集接毒后死亡的番鸭胚尿囊液，其中鸭黄病毒WR株的含量为10^2.68 ELD₅₀/0.2ml，将番鸭胚尿囊液经甲醛灭活加入白油佐剂进行乳化，制备成常规的油乳剂灭活疫苗。

本发明的显著优点：

本发明首次提出了用鸭黄病毒WR株制备针对鸭黄病毒的灭活疫苗，该疫苗的研究和制备解决了我国当前该病无法进行有效预防的缺陷，可有效解决当前鸭黄病毒发病率高、造成鸭只产蛋骤降的损失。用鸭黄病毒WR株制备灭活疫苗，工艺简单、操作方便，且制备出的疫苗抗原性好、安全性高，对外界环境无任何不良影响，容易通过安全评价。

本发明制备的鸭黄病毒灭活疫苗不会对鸭只产生任何不良反应，实验安全性高，而且对免疫鸭只体内能够诱导高水平的抗体和中和抗体，说明免疫后的鸭只能够有效抵抗新型鸭黄病毒病毒的攻击。

目前，新型鸭黄病毒在我国大部分省市均有大面积的流行，该疫苗的制备、生产、应用和普及将为我国有效防控该病提供有力保障。

具体实施方式

实施例1

本发明的鸭黄病毒WR株，是通过如下方式获得的：

（1）病毒的分离培养：2010年，从表现产蛋异常的病死种鸭中无菌采集其卵巢组织，按常规方法匀浆、反复冻融4次，4℃条件下12 000 r/min离心10 min，无菌条件下吸取上清液，冻存备用。

（2）病原禽胚分离培养：将分离后的病毒经尿囊腔接种10日龄番鸭胚5枚，每枚0.3 mL，接种后置37℃下恒温孵化，连续观察10d。病毒连续传5代直至稳定，可100%致死番鸭胚，获得病毒番鸭胚适应毒株即鸭黄病毒WR株。

本发明的鸭黄病毒灭活疫苗，是通过如下方式获得的：

将病毒番鸭胚适应毒株接种番鸭胚，收集接毒后死亡的番鸭胚尿囊液，其中鸭黄病毒WR株的含量为10^2.68 ELD₅₀/0.2ml，将番鸭胚尿囊液经甲醛灭活加入白油佐剂进行乳化，制备成常规的油乳剂灭活疫苗。

将WR株病毒在番鸭胚中连续传代30代，每隔5代测定一次病毒的ELD50，证明该病毒在番鸭胚中传代表现稳定，接毒后对番鸭胚的致死时间稳定在84h左右。

制备的灭活疫苗的免疫结果如下

1、疫苗安全性试验

1.1雏鸭安全性试验