[发明专利]一种油菜多目标性状的快速聚合育种方法

权利要求书

1.一种油菜多目标性状的快速聚合育种方法，包括步骤：

A、多目标性状的异地组装与聚合：选择需要聚合的优异育种目标性状，冬季在当地温室先配制具有两个性状的单交组合，当年异地夏繁各单交组合，并配制成具有多个亲本的复式杂交组合，对多目标性状的亲本按育种需要进行组装与聚合；

B、目的基因型的快速固定与纯合：秋播将多亲本复式杂交组合F₁在当地油菜育种田直播种植，次年春油菜初花期取F₁植株幼蕾进行小孢子苗培养，秋季将单倍体小孢子苗用2%秋水仙碱溶液浸泡根部30min后栽入盆钵，活棵后长至5-6叶期移栽到大田，获得双单倍体DH株系群体；

C、聚合性状的有效鉴定与筛选：对DH株系按目标性状进行田间和室内鉴定、筛选，或对目标性状进行分子标记辅助选择，选育聚合了多个目标性状的育种新材料。

2.根据权利要求1所述的方法在选育甘蓝型油菜矮杆、高油的CMS保持系方面的应用，其特征在于： 

A：当年12月下旬在当地将已通过春化的细胞质雄性不育保持系宁B7和高含油量品系HOC2、矮杆品系APL03从油菜育种直播大田移栽到温室进行加代繁殖，使油菜在温室的开花期提前到第2年的2月上旬，油菜开花后分别配制宁B7×HOC2和宁B7×APL03两个单交杂交组合，3月中旬收获F₁种子；同年3月底至4月初到异地加代夏繁F₁，正常春播，7月底8月初油菜开花期配制(宁B7×HOC2)×(宁B7×APL03)的多亲本复式杂交组合，9月底收获复式杂交F₁种子，返回当地正常秋播；

B：秋播将多亲本复式杂交组合（宁B7×HOC2）×（宁B7×APL03）F₁在当地油菜育种田直播种植，第3年春油菜初花期取F₁植株幼蕾进行小孢子苗培养：于每日上午7时摘取刚开放第一朵花的花序，用吸水纸湿润处理后置于4℃恒温冰箱24h，次日挑选长度为4.0mm-5.0mm的花蕾用70％酒精浸泡30s，1％升汞表面消毒10min，无菌水冲洗3次，每次冲洗2min，将消毒花蕾置于无菌玻璃管中，加B₅提取液1ml，用玻璃棒沿管壁将花蕾捣碎挤出小孢子，经400目滤膜过滤，1000rpm/min离心5min，去除上清液后再加入B₅提取液悬浮小孢子，复重1次，去除上清液，加入添加了质量比13％蔗糖的NLN培养基转入三角瓶中，32℃热激培养24h，25℃黑暗静止培养,直至出现可见的小白点胚状体时，转至25℃恒温摇床50r/min振荡培养，待胚状体长度达4mm-6mm时转到B₅固体培养基上，25℃光照培养，每天光照时间16小时，直至成苗，当年秋季将单倍体小孢子苗用2%秋水仙碱溶液浸泡根部30min后栽入盆钵，活棵后长至5-6叶期移栽到大田，获得双单倍体DH株系群体；

C：第4年春DH株系油菜开花后选择株高低于140cm的可育植株套袋自交，并与细胞质雄性不育系宁A7为母本测交鉴定恢保关系，油菜成熟后收获全部套袋自交种子和测交F₁，父本自交种子用索氏法测定种子含油量，同年秋将F₁和相应的测交父本成对种植，次年春鉴定F₁育性和父本的植株高度、含油率性状，选择F₁表现雄性不育，测交父本株高低于140cm，含油率大于45%的DH株系单株，即为育成具有矮杆、高油和CMS保持特性的三个目标性状聚合在一起的甘蓝型油菜新材料。