[发明专利]一种核酸疫苗佐剂及其构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物学技术领域。在本领域中，本发明尤其涉及核酸疫苗的免疫活性增强技术领域。 

背景技术

核酸疫苗是指含有某种抗原蛋白基因序列的质粒载体作为疫苗，直接导入动物细胞内，通过宿主的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，从而使得宿主获得相应的免疫保护。由于核酸疫苗能够诱导机体产生全面的免疫应答，并且对不同亚型的病原体具有交叉抵御作用，同时又具有免疫保护效果持久、安全、生产方便等一系列优点，故被认为是继减毒、灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗。核酸疫苗的优点主要有：1、不仅可以诱导针对保守抗原的保护性抗体产生，而且可以同时激发机体的CTL免疫，这样对象病毒感染性疾病等依赖细胞免疫清除病原的疾病的预防也就更加有效。而且，基因疫苗接种后，抗原在细胞内的表达与病毒自然感染过程中病毒抗原的表达一致，能够使抗原以自然的形式被加工后递呈给免疫识别系统。这对于构象型抗原表位诱发中和性抗体的产生是必要的；2、制备简便，省时省力基因疫苗的制备只需对编码抗原的基因进行设计和克隆，不需在体外表达和纯化蛋白质，且外源基因较容易克隆进表达载体，数天内可扩增并纯化之，特别是对那些在流行病暴发时可快速开发新的疫苗。3、免疫应答较持久，文献报道在肌注后15个月可用PCR检测到外源质粒DNA的存在。有实验证明在注射后19个月仍可检测到外源基因相当数量的表达。这样外源基因及其表达持续存在，使得机体中特异的免疫记忆细胞的记忆被强化，从而使机体获得的保护性免疫较持久存在。4、同种异株交叉保护这是基因疫苗的最大优点之一。在制备基因疫苗时，可通过对基因表达载体所携带的靶基因进行改造，从而选择抗原决定簇。选择某一病原体的编码保守蛋白的核酸序列作为基因疫苗，因其不会变异，故可对同一种病原的漂变或新型产生交叉免疫， 从而起到免疫保护作用。5、可用于肿瘤防治CTL应答也是机体杀死癌变细胞的有效清除途径。若能找到在细胞恶性转化过程中的关键蛋白，就能制备肿瘤的CTL疫苗。该基因疫苗接种后，可诱发机体产生CTL免疫应答，对细胞的恶变进行免疫监视，对癌变的细胞产生免疫应答，从而为癌症的预防和免疫治疗提供强有力的新式武器。 

然而DNA疫苗也存在着明显的不足，即DNA疫苗刺激机体产生免疫应答的能力往往比常规疫苗接种引起的免疫反应弱，这就给DNA疫苗的研究提出了新的挑战。因此，新型疫苗佐剂已成为当今倍受关注的研究热点。免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用，能促进、延长或增强对疫苗抗原特异性免疫应答的物质。目前在动物疫苗的配制中使用最广泛的是油佐剂和铝盐佐剂等，而作为DNA疫苗的佐剂主要有细胞因子、共刺激分子、CpG DNA和脂质体(Donnelly，JJ，Wahren，B，and Liu，MA.DNA vaccines：progress and challenges.J Immunol.，2005，175：633-639.)。 

小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)为集落刺激因子家族成员之一，属于酪氨酸激酶受体，可刺激CD34+造血干细胞的增殖和分化，并诱导特定亚群的树突状细胞成熟。研究发现，通过注射Flt3L可以使抗原特异性免疫反应显著增强，并显著增加DC的数量和频率，Flt3L可与多种细胞因子有协同作用，是一种良好的DC扩增剂，在小动物和人的体内及体外进行实验都取得了良好的效果(Pulendran B.Modulatingvaccine responses with dendritic cells and Toll-like receptors.Immunol Rev.2004；199：227-50)。而抗原特异性免疫应答的诱生很大程度上取决于机体对该抗原分子的处理和提呈的效率。基于DC在基因免疫中的重要作用，如果招募包括DC在内的APC至靶抗原所在部位，增加抗原的摄取和提呈，则可能利于增强基因免疫的效果。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有细胞免疫增强活性的核酸疫苗佐剂及其构建方法。

本发明设想将Flt3L做为一种的核酸疫苗佐剂分子，本发明在克隆Flt3L基因过程中获得了一段缺少部分碱基的序列，通过实验证明该序列 同样具有募集和活化DC的作用，目前未见该序列的相关报道。