[发明专利]一种改良的过碘酸雪夫氏反应法快速染色试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种过碘酸雪夫氏反应(PAS)法快速染色试剂盒，特别是一种改良的过碘酸雪夫氏反应(PAS)法快速染色试剂盒

背景技术

真菌是指具有真正细胞核、产生孢子、不含叶绿素，以寄生或腐生方式吸取养料，能进行有性和(或)无性繁殖，具有纤维素(或其他葡聚糖)或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。真菌侵犯人体常继发于其他疾患，如恶性肿瘤、TB、糖尿病等慢性消耗性疾病；大剤量X线照射；免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下；大量应用肾上腺皮质激素的病人，其炎症反应多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、导管插管、放疗等应用引起局部组织损伤，为真菌的入侵提供了条件。近年来由于免疫缺陷病毒感染者的不断出现，使原来不致病的真菌转为致病真菌。因此，真菌感染已经成为一个日益严峻的问题。

目前真菌检测方法主要有：形态学检查、培养法及新兴的的血清学检测抗原/抗体、分子生物学检测其靶DNA等。真菌培养法需时间较长，而新兴的多种非培养法的敏感性和特异性仍不能满足临床诊断的需要，更不能指导抗真菌治疗的启动和终止，故真菌染色镜检仍然是真菌实验室常规检测的最重要手段。真菌用H-E染色一般着色不良，因此需用特殊的染色方法来显色，六胺银法(GMS)用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。六胺银染色能显示大多数真菌，并且能很好的将真菌特点显示出来，是显示真菌效果最佳的一种方法，但此方法操作繁琐，技术要求较多，不易控制温度，效果不稳定、不易获得菌体及背景清晰的染色效果等。过碘酸雪夫氏反应(Periodic Acid Schiff，PAS)法用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基，后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色。若用孔雀绿复染，真菌更易区别，PAS染色能特异性着染真菌胞壁，优点是操作简单，不容易过染，并且能较好的显示大多数真菌，包括单细胞型和多细胞型真菌，这两种方法可显示大多数真菌，是最广泛最常用的染色方法。但在临床实验室工作中，这两种方法均不可避免的有需要特殊且危险的化学试剂、操作繁琐、技术要点要求较多不易掌握、效果不稳定、不易区分菌体与背景等缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种改良的过碘酸雪夫氏反应(PAS)法快速染色试剂盒，使用本试剂盒，可使检测流程缩短到10秒钟左右，非常适合大规模临床操作。

为达到上述的发明目的，本发明采用以下技术方案：

这种改良的过碘酸雪夫氏反应法快速染色试剂盒，它包括：染色液、防脱胶片、盖物片，所述的染色液是活性品红液与固绿工作液的混合液，并用95％乙醇和0.5％亚硫酸氢钠液稀释制成。

所述的活性品红液与固绿工作液按2∶1体积比混合，再加入活性品红液两倍体积的95％乙醇以及与活性品红等体积的0.5％亚硫酸氢钠液，其各成份的体积比为：活性品红液∶固绿工作液∶95％乙醇∶0.5％亚硫酸氢钠液＝2∶1∶4∶2。

加入焦亚硫酸钠的用量与碱性品红用量的重量比为2.3～2.5∶1。

固绿原粉与磷钨酸的重量比为4～3∶1。

本实验的基理是：凡细胞壁主要成分是多糖(80％-90％)的物质，酸性条件下多糖分子内的乙二醇基变为乙二醛基，品红可与醛基反应，生成一种紫红色的产物，固绿也可与醛基反应生产绿色物质，沉淀在多糖、糖蛋白等部位，从而显示物质的形态及结构。本产品使用PAS改良法，即用高碘酸氧化细胞壁的多糖使之游离出醛基，后者与无色品红和固绿结合，根据病原菌细胞壁多糖成分的不同生成新的复合物而被显色成深绿色、红色或蓝色等。

本发明的优点：

1).首次将品红与固绿共同制备成快速生物染色液；

快速：10秒左右；

简便：直接观察，免冲洗；

2).避免了原有10％KOH法虽显色快但查真菌不能显色的弊端；

3).解决了氨银法带来的生物安全差及环境污染的问题，使之无毒无害无环境污染；

4).适用范围广：适合皮屑、黏液、阴道分泌物等临床上的大量标本；

5).将高碘酸附着在载玻片上，既节省了产品的包材，又简化了操作流程，尤其符合临床标本量大的要求；

6).高碘酸为易燃易爆产品，由于高碘酸附着在载玻片上，使之由液态变为干燥状态，大大降低了其危险性，也从而解决了其不适宜常规长途储运的弊端；更易做到标准化操作，避免了因人为操作误差造成的可重复性差。

预期用途：