[发明专利]用于抑制植物病原菌的博落回生物碱及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及博落回生物总碱和主要单体生物碱的制备及其对植物病原真菌和细菌的抑制作用，属于农药技术领域。

背景技术

博落回(Macleaya cordata(Willd.)R.Br.)在分类上属于罂粟科(Papaveraceae)博落回属，为多年生高大草本，主要生长于海拔120-180米的丘陵或低山林的灌丛或草丛中，分布在我国的贵州、广西、广东、福建、江西、湖南、湖北、安徽、浙江、江苏、河南、陕西、甘肃南部等省份，少量分布在日本中部。博落回是重要的药用植物，具有杀虫、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。博落回中总生物碱含量约占全草干重的1％，为异喹啉类生物碱。生物碱被认为是博落回的主要生物活性成分。

目前尚未见博落回生物碱对根癌土壤杆菌、黄瓜角斑病菌、番茄细菌斑点病菌等植物病原细菌，以及番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌、棉花枯萎病菌、小麦赤霉、水稻纹枯病菌、苹果轮纹病菌等植物病原真菌的抑制作用报道。

本发明着重于博落回总碱及其主要单体生物碱的制备，以及生物碱对上述植物病原细菌和真菌的抑制活性，为新型植物源杀菌剂的研究与开发提供依据。

为了保护环境和人类，以及维持农业的可持续发展，急需不断研制高效、低毒、低残留的环境相容型农药。本发明的目的是提供博落回生物碱作为高效抗菌剂在抑制植物病原真菌和病原细菌上应用的例子。

发明内容

本发明涉及博落回生物总碱和主要单体生物碱的制备及其对植物病原真菌和细菌的抑制作用，提供如下的技术方法。

1、博落回生物总碱的制备

采用酸提碱沉方法得博落回总生物碱，得率为0.7％(g/g干重)。

2、博落回主要生物碱的分离与结构鉴定

采用多种柱层析并结合活性追踪分离的方法，从博落回总碱中分离并鉴定出血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱等4个异喹啉类生物碱。

3、博落回生物碱对细菌的抑制作用

采用多孔板生长速率法，测定血根碱和白屈菜红碱对根癌土壤杆菌、黄瓜角斑病菌和番茄细菌斑点病菌具有明显的抑制作用(表3)。

4、博落回生物碱对稻瘟菌孢子萌发的抑制作用

博落回主要单体生物碱：血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱对稻瘟菌孢子萌发具有明显的抑制作用，半抑制浓度在10μg/mL到40μg/mL之间(表4)。

5、博落回生物碱对真菌生长的抑制作用

采用液体培养基生长速率法，测定血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱对番茄灰霉病菌、苹果轮纹病菌、小麦赤霉、番茄枯萎病菌、棉花枯萎病菌、水稻纹枯病菌的生长均具有明显的抑制作用(表5)。

本发明的优点：本发明首次明确了博落回生物碱具有广谱的抗植物病原细菌和真菌的活性，主要的抗菌活性生物碱为：血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和α-别隐品碱。目的是利用植物资源，获得抗菌活性成分，为植物源农药的研究与开发，为探讨植物次生代谢成分的生理生态功能提供依据。

为了更好地理解本发明，下面结合本发明的实施例进一步说明本发明的实质性内容，但本发明的内容并不局限于此。

具体实施方式

实施例1：博落回总碱的制备

于秋天采集博落回全株，凉干后粉碎，取3kg粉末，用2倍体积1％硫酸室温下提取3次(每次3天)，滤液用氢氧化钠调pH值至9，得沉淀物。将沉淀物用1L 95％乙醇于80℃下回流提取3次(每次5小时)，提取液用50％硫酸酸化至pH 2，生物碱成盐析出，过滤，即得博落回总生物碱21g，计算总生物碱含量为植物干重的0.7％。

实施例2：博落回总碱对植物病原细菌的抑制活性

用实施例1中所述的方法制备到总生物碱，采用打孔药剂扩散法，测定博落回总生物碱对植物病原细菌的抑制活性。

(1)活性测定的植物病原细菌菌株：供试细菌包括：根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens ATCC11158)、黄瓜角斑病菌(Pseudomonas lachrymans ATCC 11921)和番茄细菌斑点病菌(Xanthomonasvesicatoria ATCC 11633)。上述供试菌株长期保存在-20℃下，在活性测定前，需要在LB平板上对供试细菌进行活化培养(28℃，暗)48h，然后挑取单菌落，在LB液体培养基中摇培(28℃，暗，150rpm)24h，然后继代培养8-12h，菌液浓度达到10⁹ cfu/mL，即可用于活性测定。