本发明属于分析化学技术领域,涉及一种尿酸的无酶比色检测方法。本发明首先制备集成化CoP/NF整体式类过氧化物酶,然后以CoP/NF作为类过氧化物酶,催化TMB和过氧化氢溶液的氧化还原反应,产生显色物质TMBox,因TMBox能被尿酸选择性地还原成无色TMB,原显色反应产生的吸光度随尿酸浓度的增加而降低,通过测定最终所得显色物质的吸光度,得到吸光度随尿酸浓度的增加而减少的曲线,根据此标准曲线来确定待测物的尿酸含量。本发明公开的分析方法既不需要过氧化物酶,也不需要尿酸氧化酶,实现了尿酸的无酶检测,检测成本低廉,操作简单;尿酸的检测范围为1~200μM,检测限低至1μM;对尿酸的响应灵敏,具有良好的特异性,可实现对血清和尿液中尿酸的准确分析。
1.一种尿酸的无酶比色检测方法,首先绘制紫外吸收光谱标准工作曲线,然后通过工作曲线来确定待测物的尿酸含量,其特征在于,包括如下步骤:/n1)取2.32 mL的醋酸盐缓冲液,依次加入480μL尿酸磷酸缓冲溶液、0.05 mL 8 mM的TMB、0.15 mL 9.8 M的过氧化氢溶液和1片0.5 cm×0.5 cm 的CoP/NF,然后将体系混合均匀;所述尿酸磷酸缓冲溶液的浓度为1μM、2μM、5μM、10μM、20μM、30μM、50μM、75μM、100μM、150μM或200μM,所述CoP/NF指磷化钴CoP纳米片阵列生长在泡沫镍NF表面而形成的整体式类过氧化物酶;/n2)将混合液在30℃水浴中反应4~36 min;/n3)用紫外-可见吸收分光光度计测定混合溶液紫外-可见吸收光谱,记录波长为652nm处的吸光度并绘制尿酸浓度-吸光度标准工作曲线;/n4)将待测尿酸样品重复步骤1)-2),用紫外-可见吸收分光光度计测定吸光度,通过标准工作曲线获得尿酸浓度。/n
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