本发明公开了一种4-硝基酚-4-单加氧酶基因及制备方法和用途,一种分离的多肽,序列为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。其步骤是:首先以恶臭假单胞菌NyZ402菌株的基因组为模板,利用PCR的方法扩增获得一段对苯二酚双加氧酶基因片段;其次是通过染色体步移的方法克隆获得参与4-硝基酚代谢的基因簇,获得pnpC基因附近的基因;第三是对获得的基因簇序列进行比对分析,获取4-硝基酚-4-单加氧酶基因,在国际基因数据库中,与所涉及的4-硝基酚-4-单加氧酶蛋白质序列无明显相似性。4-硝基酚-4-单加氧酶基因在芳香烃环境污染物降解中的应用。该方法易行,操作简便,能够快速的获得目的基因片段,尤其是长片段。为解决硝基酚环境污染问题具有着重要的理论和应用价值。