本发明提供了一种来源于土壤宏基因组文库的新型邻苯二甲酸酯水解酶基因,其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.l和SEQ ID N0.2所示。将该酯酶基因连接到表达载体pET28a(+)后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(EstJ6)分子量为33.31kDa。EstJ6对邻苯二甲酸酯具有广泛的底物特异性,EstJ6不仅可以水解具有简单侧链的邻苯二甲酸酯,而且可以水解具有复杂且较长侧链的邻苯二甲酸二乙基己酯和邻苯二甲酸单乙基己酯。本发明中的新型邻苯二甲酸酯水解酶,由于其特有的活性及酶学特性,使其可应用于食品工业、农业及生物技术等领域。