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[发明专利]一种培育克隆动物或转基因克隆动物的方法-CN201010241156.0无效
发明人：李光鹏 -专利权人：内蒙古大学
申请日： 2010-07-29 - 公布日： 2012-02-08 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明提供的上述方法包括如下步骤：1)获得去核卵母细胞，2)将供体细胞与所述去核卵母细胞融合得到重构胚，3)将所述重构胚进行体外激活，4)将激活的重构胚进行培养，其特征在于：步骤3)中，所述体外激活包括将所述重构胚用钙离子激活剂进行2次以上的处理，然后将处理过的重构胚在蛋白合成抑制剂或蛋白质磷酸化抑制剂中激活，得到重构胚。
一种培育克隆动物转基因方法

[实用新型]一种哺乳动物体细胞核移植重构胚融合装置-CN201820555089.1有效
发明人：麦然标;石俊松;周荣;纪红美;罗绿花;蔡更元;吴珍芳 -专利权人：温氏食品集团股份有限公司
申请日： 2018-04-18 - 公布日： 2019-02-22 - 主分类号： C12M1/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种哺乳动物体细胞核移植重构胚融合装置，包括融合皿、两个电极槽和若干个微穴；若干个微穴为设于融合皿底面的盲孔，盲孔内容纳有重构胚，并且微穴的直径略小于重构胚的直径；若干个微穴为两行排列设置，各行的微穴依次间隔排列，微穴可以固定和排列重构胚，且已调整好方向和位置的重构胚不会由于调整其它重构胚方向的细小动作而发生方向的偏移，且一次可以操作20‑30个重构胚；融合皿底面上并且位于微穴的两侧各设有一第一凹槽
微穴重构胚电极槽金属丝哺乳动物体细胞核移植融合重构胚融合盲孔本实用新型凹槽连通间隔排列胶固定两侧壁行排列偏移

[发明专利]一种小鼠体细胞核移植方法-CN201710461970.5在审
发明人：李光鹏;杨磊;刘雪霏 -专利权人：内蒙古大学
申请日： 2017-06-19 - 公布日： 2017-08-29 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明公开了一种优化的小鼠体细胞核移植方法，利用卵丘细胞、胎儿成纤维细胞和胚胎干细胞这3种细胞构建了重构胚，并比较了这3种重构胚在不同激活液中的激活效率，在不同溶液中的发育效率，采用不同胚胎移植方法的妊娠效率；得出，无钙KSOM激活液是通用的高效激活液，激活效率在93.5％左右；KSOM‑AA培养液适合于卵丘和胚胎干细胞重构胚的体外培养，胎儿成纤维重构胚的最佳培养液为αMEM培养液；当重构胚体外发育至2‑细胞时期，经输卵管双侧移植，每侧移植15枚胚胎可高效获得核移植动物；本发明的方法能提高重构胚卵裂率和囊胚发育率、克隆动物出生率和成活率，继而提高从重构囊胚中获得胚胎干细胞的成功率。
一种小鼠体细胞移植方法

[发明专利]一种激活重构胚的方法-CN201010241155.6无效
发明人：李光鹏 -专利权人：内蒙古大学
申请日： 2010-07-29 - 公布日： 2012-02-08 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种激活重构胚的方法。本发明提供的上述方法包括将所述重构胚用钙离子激活剂进行2次以上的处理，然后将处理过的重构胚在蛋白合成抑制剂或蛋白质磷酸化抑制剂或磷酸二酯酶抑制剂中激活，得到激活了的重构胚。实验证明：重构胚经ionomycin激活处理2次后，克隆胚胎质量提高，将克隆胚胎移植如受体母牛(母羊)后，妊娠率、发育到期率、犊牛(羔羊)存活率大幅提高，新生犊牛(羔羊)的畸形率显著降低；如表6中体内发育情况表明
一种激活重构胚方法

[发明专利]制备克隆小型动物胚胎的方法-CN201410189550.2有效
发明人：陈玉;李杏;李林;杨珍珍;杜玉涛 -专利权人：深圳华大方舟生物技术有限公司;深圳华大基因科技有限公司
申请日： 2014-05-06 - 公布日： 2019-01-08 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明公开了制备克隆小型动物胚胎的方法，其包括以下步骤：提供离体的供体核细胞；提供离体的卵母细胞；于含有透明带消化剂的卵母细胞去核液中，将卵母细胞进行去核处理，以便获得去核卵母细胞；将去核卵母细胞与供体核细胞融合，以便获得重构胚；将重构胚进行体外激活，以便获得激活的重构胚；以及将激活的重构胚进行培养，以便获得克隆小型动物胚胎。
制备克隆小型动物胚胎方法

[发明专利]利用显微注射技术在克隆胚早期发育阶段中瞬时表达目的蛋白的方法-CN202110644657.1在审
发明人：李林;张兴举;张婷婷;窦红伟;李勇;演禹雅 -专利权人：深圳市华大农业应用研究院
申请日： 2021-06-09 - 公布日： 2021-09-07 - 主分类号： C12N15/89 文献下载
摘要：本发明涉及动物克隆与胚胎工程技术领域，尤其涉及胚胎早期发育技术领域，具体涉及利用显微注射技术在克隆胚早期发育阶段中瞬时表达目的蛋白的方法。本发明利用显微注射技术在克隆胚早期发育阶段中瞬时表达目的蛋白的方法包括以下步骤：利用显微注射技术，向动物成熟卵母细胞中导入外源RNA；制备重构胚；体外培养所得的重构胚过程中，瞬时表达目的蛋白。本发明的方法能在早期胚胎发育过程中有效表达外源蛋白，又可避免原核注射DNA造成外源基因在供体细胞核基因组上的整合，为研究早期重构胚发育关键基因功能提供一种技术路径。
利用显微注射技术克隆早期发育阶段瞬时表达目的蛋白方法

[发明专利]一种猪体细胞核移植融合方法-CN201510395624.2在审
发明人：吴珍芳;周荣;石俊松;罗绿花 -专利权人：广东温氏食品集团股份有限公司
申请日： 2015-07-06 - 公布日： 2015-10-28 - 主分类号： C12N15/06 文献下载
摘要：所述的融合方法，包含如下步骤：S1.将重构胚放入融合液中平衡，然后用融合液洗涤，再放入铺满融合液的融合槽中；S2.拨动重构胚，使供体细胞-受体卵细胞膜接触面与电极平行放置，同时使重构胚在融合槽中成曲线排列所述方法一次性可以操作融合15~20个重构胚，大幅度提升了融合效率。
种猪体细胞移植融合方法

[发明专利]组蛋白去乙酰化酶抑制剂在培育克隆胚胎或转基因胚胎中的应用-CN201010241151.8无效
发明人：李光鹏 -专利权人：内蒙古大学
申请日： 2010-07-29 - 公布日： 2012-02-08 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：所述培育克隆胚胎或转基因克隆胚胎，包括如下步骤：1)将离体的供体细胞与离体的去核卵融合得到重构胚；2)将所述重构胚进行体外激活，所述方法还包括步骤1)和步骤2)之间的TSA处理，所述TSA处理包括以下步骤：将所述步骤1)的重构胚移入含组蛋白去乙酰化酶抑制剂的胚胎培养液中培养1-6小时。实验证明：TSA处理激活前的重构胚可使染色体保持完整性，保证了移入核的遗传物质的完整性，并且TSA处理后，胚胎发育质量得到提高(7天囊胚细胞数从87.6提高到111.3)。
组蛋白乙酰化抑制剂培育克隆胚胎转基因中的应用

[发明专利]一种提高猪体细胞核移植效率的方法-CN201210474265.6有效
发明人：吴珍芳;贺晓燕;许卫华;石俊松;周荣 -专利权人：广东温氏食品集团股份有限公司
申请日： 2012-11-20 - 公布日： 2013-02-27 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高猪体细胞核移植效率的方法，包括以下步骤：S1、选择和培养卵母细胞；S2、分离和培养供体细胞；S3、采用盲吸法去除成熟卵母细胞核及第一极体，注入一个供体细胞于卵周隙中；电融合重构胚并激活重构胚；S4、将重构胚置于含有浓度为100-200μM的RG108和浓度为100-500nM的Scriptaid的PZM-3培养液中培养14-16小时，再将重构胚置于PZM-3培养液中培养；本发明能显著提高猪克隆早期胚胎的发育囊胚率和囊胚质量
一种提高体细胞移植效率方法

[发明专利]一种德保黑猪手工克隆重构胚胎体外发育的药物及应用-CN201810349338.6在审
发明人：吕玲燕;陆杏蓉;石德顺;陈宝剑;温斌华;谢炳坤;吴永绍;潘天彪 -专利权人：广西壮族自治区畜牧研究所
申请日： 2018-04-18 - 公布日： 2018-09-28 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，公开了一种德保黑猪手工克隆重构胚胎体外发育的药物及应用，对供体成纤维细胞进行5‑Aza‑CdR处理72h后发现，适宜浓度(0.25μmol/L～0.5μmol/L)的5‑Aza‑CdR可以降低供体核成纤维细胞的甲基化水平，并且提高了囊胚发育率和囊胚总细胞数，分别用不同浓度和不同时间5‑Aza‑CdR处理重构胚，统计其卵裂率、囊胚率以及囊胚细胞数，结果发现20nmol/L，72h为最佳处理条件分析由于在相继对供体和重构胚进行处理后，5‑Aza‑CdR本身的药物残留及其细胞毒性会在重构胚上表现出叠加的作用，确定了分析方法以期达到最佳效果。
重构胚供体胚胎体外发育成纤维细胞黑猪囊胚重构克隆基因工程技术最佳处理条件甲基化水平囊胚细胞细胞毒性药物残留卵裂率囊胚率总细胞叠加应用分析发育发现统计表现

[发明专利]一种抗乳房炎的奶牛育种方法-CN200610163220.1无效
发明人：扈荣良;张锦霞;张守峰;刘晔;郭学军;张菲 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所
申请日： 2006-12-11 - 公布日： 2007-05-30 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：用抗菌肽培育具有抗乳房炎病的奶牛，首先是将抗菌肽基因，构建在乳腺组织特异性表达载体中，提取外源基因进行供体细胞的转染，所有成纤维细胞均可用于核移植的供体细胞，通过筛选将获得的阳性细胞与体外培养成熟的去核卵母细胞利用电融合法构建重构胚，将经过激活的重构胚进行体内培养，然后再将发育正常的重构胚用外科手术的方法移入同步情期的寄母牛子宫内，最后获得转基因克隆奶牛。
一种乳房奶牛育种方法

[发明专利]一种生产克隆羊驼的方法-CN02135287.9无效
发明人：刘晓明 -专利权人：刘晓明
申请日： 2002-07-29 - 公布日： 2004-02-04 - 主分类号： A01K67/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种用科间核转移生产克隆羊驼的方法，包括以下步骤：用从羊驼身上采集的胚胎干细胞(ES细胞)、体细胞系制备供核细胞；制备去核的代孕动物供质卵母细胞；将供核细胞直接注射到去核的卵母细胞中，形成重构卵；对重构卵进行激活处理；将激活的重构卵移植到代孕动物的输卵管内，或在体外或体内对激活的重构卵进行培养，形成重构胚，将重构胚移植到代孕动物的子宫内；饲养代孕动物以生产克隆羊驼。
一种生产克隆羊方法

[发明专利]利用牛体细胞核移植克隆胚胎的方法-CN200810115821.4无效
发明人：于孟飞;易建明;高国龙;杨利国 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2008-06-27 - 公布日： 2008-11-12 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：发明特征是：(1)牛卵丘－卵母细胞复合体的采集与培养；(2)卵母细胞的去核；(3)供体细胞的制备；(4)共培养细胞单层的制备；(5)重构胚的构建；(6)重构胚的激活；(7)重构胚的培养等。
利用体细胞移植克隆胚胎方法

[发明专利]一种提高体细胞重编程效率的方法-CN200810119651.7有效
发明人：周琪;王柳;代相鹏;侯晓军;范勇;郝捷 -专利权人：中国科学院动物研究所
申请日： 2008-09-04 - 公布日： 2010-03-10 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明提供一种提高体细胞重编程效率的方法，一种提高克隆胚胎的体外发育率的方法，一种提高克隆胚胎的到期发育率的方法，一种提高体外核移植非人类胚胎干细胞建系效率的方法，一种用于胚胎移植的重构胚的体外处理方法，这些方法都包括采用间羧基肉桂酸二羟基酰胺处理重构胚。
一种提高体细胞编程效率方法

[发明专利]一种基于抑制H3K9me3甲基化的提高猪克隆效率的方法-CN201610117566.1在审
发明人：吴珍芳;李紫聪;李果;刘德武;蔡更元;郑恩琴 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2016-03-02 - 公布日： 2016-05-04 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于抑制H3K9me3甲基化的提高猪克隆效率的方法，该方法是通过抑制猪克隆胚胎核移植时供核细胞中Suv39H1和Suv39H2基因的表达及在核移植重构胚中过表达KDM4A mRNA来抑制Suv39H1和Suv39H2基因的有效siRNA，来抑制供核细胞中Suv39H1和Suv39H2基因的高表达，从而抑制供核细胞中的H3K9me3高甲基化水平，然后将处理后的供核细胞进行核移植，并在核移植获得的重构胚激活后，进行包浆显微注射KDM4A mRNA进一步抑制重构胚中组蛋白H3K9me3甲基化，以最终来提高猪的克隆效率。
一种基于抑制 h3k9me3 甲基化提高克隆效率方法

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