本发明公开了一种蛹虫草菌活性RT‑PCR检测引物和检测方法,属于分子检测和鉴定技术领域。本发明引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示。采用所述特异性引物SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2可有效地扩增蛹虫草菌的过氧化氢酶基因片段,片段大小341bp,用于RT‑PCR方法检测。>‑ΔΔCT统计分析,与对照菌株相比,样品值/对照值为判断标准,比值大于或者等于1,该菌种可用于生产;0.1比值1,菌种活性较弱,使用时应谨慎;比值1/10时,该菌株基本不能用于蚕蛹虫草和虫草花的生产,检测结果能够预示蛹虫草菌的相对活性,为生产上菌种筛选提供技术依据。