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[发明专利]一种自发永生化树鼩脑微血管内皮细胞系的建立方法-CN202211322803.X在审
发明人：王文广;陆彩霞;代解杰;李娜;陈柳;邱敏;孙晓梅;仝品芬;钱兴丽;王玺 -专利权人：中国医学科学院医学生物学研究所
申请日： 2022-10-27 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种自发永生化树鼩脑微血管内皮细胞系的建立方法，该方法通过树鼩大脑皮层的分离、树鼩脑微血管段的富集、树鼩脑微血管段的消化分离、树鼩脑微血管内皮细胞的培养、树鼩脑微血管内皮细胞的初步纯化培养、树鼩脑微血管内皮细胞的嘌呤霉素纯化培养、可连续传代树鼩脑微血管内皮细胞的筛选等步骤获得可连续传代120代以上的树鼩脑微血管内皮细胞，且细胞保持稳定的细胞活力和均一的细胞形态，本发明方法没有端粒酶或者SV40等外源基因的引入，避免了转化细胞引起特性改变或者恶化的风险，为体外研究脑微血管内皮细胞相关疾病提供了理想的实验材料。
一种自发永生化树鼩脑微血管内皮细胞系建立方法

[发明专利]一种脑微血管内皮细胞提取纯化方法-CN202110876479.5有效
发明人：黄志新;刘新通;卢海克 -专利权人：广东省第二人民医院（广东省卫生应急医院）
申请日： 2021-07-30 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种脑微血管内皮细胞提取纯化方法，涉及细胞纯化的技术领域。其提取纯化方法，包括以下步骤：S1、粗提小鼠脑组织中的脑微血管内皮细胞；S2、对S1处理后的脑微血管内皮细胞混合物进行第一次CD31免疫磁珠分选以纯化；S3、对S2处理后的脑微血管内皮细胞进行第二次CD31免疫磁珠分选以纯化，即得纯化后的脑微血管内皮细胞。本申请采用CD31磁珠二次分选的方式，降低对脑微血管内皮细胞活性的损伤，分离纯化效率高，操作步骤相对简单，可以获得高纯度、高产量及高活性的脑微血管内皮细胞。
一种微血管内皮细胞提取纯化方法

[发明专利]一种大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法-CN201610556064.9在审
发明人：田瑞;张亚洲;蒋敏;齐来俊 -专利权人：江苏齐氏生物科技有限公司
申请日： 2016-06-30 - 公布日： 2018-01-09 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法，包括步骤(a)大鼠颈椎脱臼处死，消毒并断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑；(b)在无菌条件下，剥离解剖去除小脑、间脑以及去除软脑膜和脑膜大血管等，保留大脑皮质；(c)通过机械酶消化法，并结合连续密度梯度离心法获得纯度较高的脑微血管片段；(d)将纯化的脑微血管片段铺置特制的细胞培养皿，并使用两种不同的培养基分离培养脑微血管内皮细胞。本发明提供的大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法可获得产量高、纯度高且生存时间较长的大鼠脑微血管内皮细胞。
一种大鼠微血管内皮细胞分离培养方法

[发明专利]血脑屏障体外模型及其制备方法-CN202210602589.7在审
发明人：许太林;罗勇;张学记 -专利权人：深圳大学
申请日： 2022-05-30 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：该血脑屏障体外模型包括石英管和分别位于石英管两端的第一陶瓷导电凝胶层和第二陶瓷导电凝胶层，石英管内设有在超声压力复合场条件下形成的脑微血管内皮细胞单层，脑微血管内皮细胞单层内的细胞之间以及脑微血管内皮细胞单层与石英管内壁之间通过DNA链连接，脑微血管内皮细胞单层的上表面黏附生长有星型胶质细胞和小胶质细胞。该血脑屏障体外模型可以更真实的模拟血脑屏障结构，而且不同细胞之间的直接共培养接触可以更真实的反应实际情况，这样的血脑屏障体外模型可以有益于中枢神经系统的药物开发筛选，具有很好的应用前景。
血脑屏障体外模型及其制备方法

[发明专利]一种体外分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞的方法-CN201410214962.7有效
发明人：董虹;胡格;张涛;姜代勋;段慧琴;穆祥;张倩;冯波;王鑫 -专利权人：北京农学院
申请日： 2014-05-21 - 公布日： 2017-09-01 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种体外分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞的方法，取7～10日龄SD大鼠分离的大脑皮质，经Ⅱ型分散酶消化、两次加入15％葡聚糖溶液三次离心后获得大鼠脑微血管段，用胶原酶/分散酶消化后，在37℃、5％CO2培养箱中进行原代细胞培养。本发明的体外分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞的方法，简易可行、获得细胞纯度较高，成功分离培养了大鼠脑微血管内皮细胞，倒置显微镜下单个细胞呈短梭形或多角形，汇合后呈铺路石样，单层贴壁生长；经免疫荧光检测第Ⅷ
一种体外分离培养大鼠微血管内皮细胞方法

[发明专利]氨苯砜在制备保护脑微血管的药物中的应用-CN201710165583.7在审
发明人：郑乐民;崔德华;战锐;樊东升 -专利权人：郑乐民
申请日： 2017-03-20 - 公布日： 2017-09-08 - 主分类号： A61K31/145 文献下载
摘要：本发明公开了氨苯砜在制备保护脑微血管的药物中的应用。氨苯砜在有效作用浓度对内皮细胞没有毒性，在经氧化低密度脂蛋白（Oxidation low‑density lipoprotein,oxLDL）处理的HBMECs细胞中能够提高Tight Junction的水平，从而保护HBMECs保持内皮形态；在高脂饮食饲养的小鼠中，氨苯砜能够通过提高脑微血管内皮细胞Tight Junction的水平，保护脑微血管完整性。
氨苯砜制备保护微血管药物中的应用

[发明专利]一种用于快速检测经典Wnt信号通路活性的脑血管内皮细胞系-CN201910412805.X在审
发明人：畅君雷;王田喜;尹美芳;丘林辉 -专利权人：深圳先进技术研究院
申请日： 2019-05-17 - 公布日： 2019-09-10 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明提供了一种稳定表达TOP‑Flash/Renilla双荧光素酶报告基因的脑血管内皮细胞系的制备方法，其通过以下方法步骤获得：1)选择脑微血管内皮细胞，并以带有Renilla基因的慢病毒感染脑微血管内皮细胞，筛选获得稳定表达Renilla的细胞系；2)以带有TOP‑Flash基因的慢病毒感染步骤1)获得的细胞系，筛选获得通知稳定表达Renilla和TOP‑Flash双荧光素酶报告基因的脑血管内皮细胞系。本发明的细胞系，能够用于筛选激活脑血管内皮细胞内Wnt信号通路活性的活性物质，提高了筛选效率和准确性，制备方法简单。
内皮细胞系稳定表达脑血管筛选双荧光素酶报告基因脑微血管内皮细胞慢病毒感染制备脑血管内皮细胞活性物质快速检测基因激活

[发明专利]一种微血管内皮细胞制剂及其应用-CN202310867078.2在审
发明人：张宇;李海;刘柘一;李雪峰;田宏 -专利权人：西安交通大学
申请日： 2023-07-14 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种微血管内皮细胞制剂及其应用，属于生物医学工程领域。本发明公开的微血管内皮细胞制剂由微血管内皮细胞提取物和微血管内皮细胞外泌体冻存液组成，同时保留了微血管内皮细胞分泌型和非分泌型有效成份，补充到常规培养液中使其更接近血管内皮细胞生长的体液环境，进而发挥促进人血管内皮细胞增殖的作用本发明对人血管内皮细胞培养体系的优化将为血管内皮形成及病变机理研究、血管内皮细胞移植的临床实验等提供重要的细胞资源保障，具有良好的研究及应用价值。
一种微血管内皮细胞制剂及其应用

[发明专利]一种分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法-CN201810913798.7在审
发明人：赵成诚;黄祥宏;李娜 -专利权人：武汉华联科生物技术有限公司
申请日： 2018-08-13 - 公布日： 2018-11-30 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法。现阶段常采用大鼠大脑皮质直接进行原代分离，但由于鼠龄较大，细胞活力较弱，因此分离出来的细胞纯度相对较低，同时活力也相对较差。本发明针对上述问题，提供一种方法简单且细胞成活率高的分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法。本发明提供的一种分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法步骤简单，更方便于实际应用，且分离出的原代细胞活力强、纯度高以及存活率高。
脑微血管内皮细胞大鼠细胞生物学领域大鼠大脑皮质细胞成活率细胞纯度细胞活力原代分离原代细胞存活率活力强鼠龄应用

[发明专利]成年大鼠心脏微血管内皮细胞体外分离、扩增的方法-CN200810017465.2无效
发明人：王海昌;张荣庆;曹丰;魏丽萍 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2008-01-31 - 公布日： 2009-06-24 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种成年大鼠心脏微血管内皮细胞体外分离、扩增的方法，其提供了心脏内皮功能相关研究的理想细胞模型以及心肌梗死后血管新生治疗以及组织工程细胞的补充来源，为深入研究临床治疗心肌梗死、心血管内皮功能障碍等奠定了基础本发明采用的技术方案为：(1)利用心脏微血管内皮细胞的生物学特性，采用酶消化法分离富集成年大鼠心脏微血管内皮细胞，利用内皮细胞的自我更新和增殖特性进行扩增，从而获得大量心脏微血管内皮细胞；(2)分离出的细胞在体外进行分离纯化；(3)分离出的细胞在体外进行纯化扩增。
成年大鼠心脏微血管内皮细胞体外分离扩增方法

[发明专利]使用带电表面从诱导多能干细胞产生多个谱系的方法-CN202080053956.1在审
发明人： D·拉杰什;C·姆恩;S·伯顿;M·戈德兰;M·麦克拉山;A·穆欣斯基;金贵惠;M·汉考克;麻妃子大岛;A·斯召赛;S·迪克森 -专利权人：富士胶片细胞动力公司;富士胶片控股美国公司
申请日： 2020-06-15 - 公布日： 2022-03-11 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本公开内容提供了从诱导多能干细胞产生祖细胞的方法，其中祖细胞包括内皮细胞、周细胞、脑微血管内皮细胞(BMEC)、间充质干细胞(MSC)、造血前体细胞(HPC)、小胶质细胞或神经前体细胞(NPC)。
使用带电表面诱导多能干细胞产生谱系方法

[发明专利]一种原代脊髓微血管内皮细胞的分离培养方法及由其得到的脊髓微血管内皮细胞-CN202210231390.8在审
发明人：戴建武;尤志峰;沈贺;高旭 -专利权人：中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所
申请日： 2022-03-10 - 公布日： 2022-04-08 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种原代脊髓微血管内皮细胞的分离培养方法及由其得到的脊髓微血管内皮细胞，所述方法包括如下步骤：（1）将脊髓组织与平衡盐溶液混合，进行研磨，离心，收集沉淀；（2）将步骤（1）得到的沉淀与富集试剂混合，离心，弃上清，得富集的脊髓微血管片段；（3）将得到的脊髓微血管片段与酶混合，消化，得脊髓微血管内皮细胞；（4）将脊髓微血管内皮细胞与增殖培养基混合，接种于蛋白质和/或多肽包被的细胞培养板上，进行一次培养所述方法稳定性高、可重复性好、简便快速、成本低、得到的脊髓微血管内皮细胞纯度高且产量高，具有重要的应用价值。
一种脊髓微血管内皮细胞分离培养方法得到

[发明专利]一种大鼠肺微血管内皮细胞的分离培养与鉴定方法-CN201510391095.9在审
发明人：蔡维霞;胡大海;朱雄翔;韩军涛;官浩;郑朝;王洪涛;陶克;石继红;王耘川;杨薛康;计鹏;韩士超 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2015-07-06 - 公布日： 2015-09-30 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开一种大鼠肺微血管内皮细胞分离培养方法，采用ECM内皮细胞专用培养基培养大鼠肺微血管内皮细胞，其它类型细胞混杂少，内皮细胞专用培养基ECM培养的PMVECs纯度则高达99.28％，内皮细胞生长速度快平均2-3天可传一代，可以更好的满足后续实验研究，建立了一种取材方便、操作简单、繁殖速度快、纯度高的一种大鼠肺微血管内皮细胞的分离培养与鉴定方法。
一种大鼠微血管内皮细胞分离培养鉴定方法

[发明专利]一种分离纯化大鼠真皮微血管内皮细胞的方法-CN201510319938.4在审
发明人：张涛;穆祥;董虹;胡格;杨重锦 -专利权人：北京农学院
申请日： 2015-06-12 - 公布日： 2015-09-02 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种分离纯化大鼠真皮微血管内皮细胞的方法，涉及动物血管内皮细胞体外培养技术领域，具体是大鼠真皮微血管内皮细胞的体外培养方法。其特征在于：大鼠皮肤用中性蛋白酶II消化，分离获得真皮层，再用胶原酶I和II消化，获得单细胞悬液，然后利用CD31免疫磁珠分选技术获得纯化的目标细胞。通过上述方式，本发明能够简便、有效地解决微血管内皮细胞培养中杂细胞的污染，分离获得高纯度的大鼠真皮微血管内皮细胞，经20次传代培养后无显著形态学特征变化。
一种分离纯化大鼠真皮微血管内皮细胞方法

[发明专利]一种利用声表面波打开血脑屏障的方法及应用-CN202310117033.3在审
发明人：杨欣;王珂;孙超 -专利权人：武汉欧必诺生物科技有限公司
申请日： 2023-02-09 - 公布日： 2023-07-11 - 主分类号： A61M37/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用声表面波打开血脑屏障的方法及应用，所述血脑屏障在打开过程中脑微血管内皮细胞跨皮电阻降低至阈值后恢复，且实现脑微血管内皮细胞活性和形态不变；本发明提供的方案可解决现有技术血脑屏障不可逆的缺陷
一种利用表面波打开血脑屏障方法应用

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