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[发明专利]分泌型大肠杆菌表达载体及其应用-CN200410074359.X有效
发明人：陈薇;徐俊杰;郭强;董大勇 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所
申请日： 2004-09-10 - 公布日： 2006-03-15 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种分泌型大肠杆菌表达载体及其应用，其目的是提供一种可在大肠杆菌中高效分泌表达外源蛋白的分泌型大肠杆菌表达载体及其应用。本发明的分泌型大肠杆菌表达载体，是含有外膜蛋白OmpA的信号肽序列的大肠杆菌表达载体，所述外膜蛋白OmpA的信号肽序列位于启动子序列和多克隆位点序列之间并紧密连接于所述多克隆位点序列。本发明的分泌型大肠杆菌表达载体可在大肠杆菌中高效分泌表达外源蛋白。
分泌大肠杆菌表达载体及其应用

[发明专利]大肠杆菌表达载体及其构建方法、应用-CN202211640578.4在审
发明人：卢煜;曹国强;张宇擎;佟小雪;周国旺;李婧瑶;邹德勇;杨娜;李雪姚;杨雪 -专利权人：黑龙江金象生化有限责任公司
申请日： 2022-12-20 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌表达载体及其构建方法、应用，属于基因工程技术领域。本发明解决了现有大肠杆菌载体在基因表达过程中表达效率低，从而导致其应用于色氨酸生产中色氨酸产率低的问题。所述大肠杆菌表达载体含有一个在大肠杆菌中具有功能的人工合成启动子序列、一段供外源基因插入表达的多克隆位点序列、一个人工转录终止序列、一个可以在大肠杆菌中进行基因克隆表达的抗性筛选标记。所述大肠杆菌表达载体可以实现基因的高效转录与翻译。本发明的大肠杆菌表达载体适用于色氨酸的生产。
大肠杆菌表达载体及其构建方法应用

[发明专利]一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌-CN202010171043.1在审
发明人：艾林;贺子桐;郑长龙 -专利权人：北京达成生物科技有限公司
申请日： 2020-03-12 - 公布日： 2020-09-18 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌及其构建方法，利用本发明的大肠杆菌工程菌进行发酵而获得，所述大肠杆菌工程菌是通过将含有如下外源DNA的表达载体转化到大肠杆菌(Escherichiacoli)而获得，所述表达载体为将所述外源DNA克隆至大肠杆菌表达载体pET‑28a(+)，得到的表达载体pET28a‑CRN。本发明的的重组施式假单胞杆菌肌酐酶大肠杆菌工程菌培养快速简单，诱导条件容易控制，生产成本低，具有工业化生产的潜力。
一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶大肠杆菌工程

[发明专利]一种在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法-CN200710303763.3无效
发明人：孙石静;张春娥;蔡国平 -专利权人：清华大学深圳研究生院
申请日： 2007-12-21 - 公布日： 2008-06-11 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法。本发明所提供的在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法是将瑞替普酶基因插入到原核表达载体的多克隆位点，得到重组表达载体，再将该重组表达载体与质粒pREP4共转化大肠杆菌，得到重组大肠杆菌，培养该重组大肠杆菌，表达得到瑞替普酶本发明方法可以大大提高瑞替普酶在大肠杆菌中的表达量，用本发明方法培养上述重组大肠杆菌，每升培养基中瑞替普酶的表达量占总蛋白的48±5％。
一种大肠杆菌表达瑞替普酶方法

[发明专利]一种自内裂解大肠杆菌的裂解酶及其应用-CN201510197003.3有效
发明人：危宏平;杨航;余军平 -专利权人：武汉菲吉乐科生物科技有限公司
申请日： 2015-04-23 - 公布日： 2017-10-27 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种自内裂解大肠杆菌的裂解酶及其应用。本发明采用基因拼接的手段，构建了一个全新的裂解酶ClyN，该酶在大肠杆菌中表达后能导致宿主大肠杆菌的自裂解，释放出胞内表达的ATP和蛋白质。重组蛋白ClyN表达质粒能很好的在大肠杆菌BL21(DE3)中复制，在IPTG的诱导下表达15 min后即可观察到明显的诱导大肠杆菌自裂解的现象，诱导裂解效率为99.8%。当宿主细菌中表达有异源增强型绿色荧光蛋白（EGFP）时，EGFP会在大肠杆菌裂解后释放到溶液中，且其释放效率是直接超声破碎效率的89%。因此，ClyN能用于异源蛋白在大肠杆菌中表达后的提取与释放，具有广大的应用前景。
一种裂解大肠杆菌及其应用

[发明专利]表达鸡大肠杆菌外膜蛋白重组菌及其构建方法与应用-CN201510082560.0在审
发明人：王连民;刘珂飞;孙珊珊 -专利权人：天津生机集团股份有限公司
申请日： 2015-02-16 - 公布日： 2015-06-10 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达鸡大肠杆菌外膜蛋白重组菌及其构建方法与应用。本发明表达鸡大肠杆菌外膜蛋白重组菌导入了鸡大肠杆菌外膜蛋白操纵子基因重组质粒，通过如下步骤构建：1鸡大肠杆菌外膜蛋白结构基因及各功能性基因的PCR扩增；2重组质粒的构建。此外，本发明还公开了一种鸡大肠杆菌重组菌外膜蛋白基因工程亚单位疫苗。本发明的表达鸡大肠杆菌外膜蛋白重组菌，其表达产物产量高，成本低，易于实现疫苗产业化生产。
表达大肠杆菌膜蛋白重组及其构建方法应用

[发明专利]一种吸附水体重金属大肠杆菌转化体及其应用-CN201811558589.1有效
发明人：王伍;章丽和;姜风英;程荣 -专利权人：温州医科大学
申请日： 2018-12-19 - 公布日： 2020-08-25 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：一种吸附水体重金属大肠杆菌转化体及其应用，该转化体由质粒pET‑Lpp‑OmpA‑IscA转化大肠杆菌获得，所述质粒包含表达载体pET‑28b，大肠杆菌IscA蛋白基因、大肠杆菌前脂蛋白信号肽Lpp基因和大肠杆菌膜蛋白通过基因工程技术，获得该质粒并构建到大肠杆菌中表达融合蛋白Lpp‑OmpA‑IscA在大肠杆菌细胞膜外的表面，构建出能够高效吸附水中多种重金属的菌株。
一种吸附水体重金属大肠杆菌转化及其应用

[发明专利]一种高效产透明质酸工程大肠杆菌及其制备方法-CN201110006213.1有效
发明人：毛自朝;杨发祥;尚海丽;程倩 -专利权人：云南省微生物发酵工程研究中心有限公司
申请日： 2011-01-13 - 公布日： 2011-08-17 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明是高效产透明质酸工程大肠杆菌及其制备方法。该工程大肠杆菌通过构建含有透明质酸合成酶基因Has和含有尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌中共同表达的重组表达载体转化大肠杆菌而获得。本发明所提供的高效产透明质酸工程大肠杆菌是pHK/JM109 CGMCC No.3926。用本发明的工程大肠杆菌能产透明质酸2g～2.5g/L,比现有技术通过大肠杆菌中表达革兰氏阳性链锁状球菌HA合成基因spHas获得的最高HA产量提高近10倍多。
一种高效透明工程大肠杆菌及其制备方法

[发明专利]用于检测和/或鉴别细菌的介质-CN200880004436.0有效
发明人： D·蒙热;S·欧伦加;J·佩里;M·佩雷;C·罗歇-达伯特 -专利权人：生物梅里埃公司
申请日： 2008-02-07 - 公布日： 2010-01-20 - 主分类号： C12Q1/10 文献下载
摘要：本发明涉及检测和/或鉴别生物学样品中大肠杆菌(E.coli)的方法，所述方法包括：a)将可能含有大肠杆菌的生物学样品接种于检测介质上以获得细菌菌落，所述检测介质包含色氨酸和由大多数大肠杆菌表达的酶A底物；b)检测表达酶A活性的菌落并将其鉴别为大肠杆菌；c)检测不表达酶A活性的菌落，进行吲哚检测，并将具有阳性吲哚检测结果的菌落鉴别为大肠杆菌。
用于检测鉴别细菌介质

[发明专利]一种在大肠杆菌中组成型、分泌型表达的载体-CN201810185847.X在审
发明人：陈定武 -专利权人：广州嘉吉生物科技有限公司
申请日： 2018-03-07 - 公布日： 2018-06-05 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及本发明涉及外源蛋白原核表达领域，具体是一种在大肠杆菌中组成型、分泌型表达的载体，其特征在于：由分泌型信号肽双链序列链接到组成型表达载体骨架构建而成，本发明的优点在于：外源基因在大肠杆菌表达时，可以在任意一种大肠杆菌中表达，不需要特殊的菌株；不需要进行诱导，可以自主表达；表达产物直接分泌到培养基中，以可溶形式存在，表达量高并且方便后续分离、纯化，并且某些在大肠杆菌体内表达对大肠杆菌有毒性的蛋白，也能够表达。
大肠杆菌分泌型表达组成型组成型表达载体大肠杆菌表达分泌型信号肽表达产物骨架构建可溶形式双链序列体内表达外源蛋白外源基因原核表达培养基表达量菌株分泌诱导蛋白

[发明专利]一种重组尿酸氧化酶的高效分泌表达及纯化方法-CN201310021023.6无效
发明人：张军;张博学;李庆春;杜研;鞠蒙蒙 -专利权人：吉林修正药业新药开发有限公司
申请日： 2013-01-21 - 公布日： 2013-06-26 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：一种重组尿酸氧化酶的高效分泌表达及纯化方法，属于医药生物工程领域。技术方案包括：由大肠杆菌碱性磷酸酶启动子、大肠杆菌LamB信号肽的编码序列的人工合成的重组尿酸氧化酶的编码序列表达重组尿酸氧化酶的大肠杆菌操纵子；将上述操纵子克隆至携大肠杆菌质粒载体pBR322中获得的表达质粒；利用含有上述大肠杆菌操纵子的表达质粒转化W3110大肠杆菌空宿主得到的分泌表达重组尿酸氧化酶的工程菌；经阳离子层析、疏水层析、阴离子层析的重组尿酸氧化酶的纯化工艺。本发明的有益效果是用大肠杆菌碱性磷酸酶启动子对蛋白表达的调控,用优化的大肠杆菌LamB信号肽引导尿酸氧化酶分泌表达，有良好的分泌表达效果。纯化方法简单易行，蛋白质纯化周期短，蛋白质收率高。
一种重组尿酸氧化酶高效分泌表达纯化方法

[发明专利]大肠杆菌自裂解方法及其专用载体与应用-CN200610078951.6有效
发明人：林章凛;徐丽华;李爽;任川 -专利权人：清华大学
申请日： 2006-04-28 - 公布日： 2006-12-20 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌自裂解方法及其专用载体与应用。该载体是自5’至3’端顺次连接有热启动子，噬菌体裂解基因和大肠杆菌终止子的大肠杆菌表达载体。该大肠杆菌自裂解方法是将所述大肠杆菌自裂解载体导入大肠杆菌中，得到重组大肠杆菌，再将重组大肠杆菌热诱导后，大肠杆菌细胞裂解。实验证明该载体经适宜的温度诱导使Lambda噬菌体的裂解基因SRRz获得表达，从而使宿主细胞裂解，释放具有生物活性的外源目标蛋白到达培养基，以利于定向进化中后续的高通量筛选的进行，具有廉价、快捷的优点。
大肠杆菌裂解方法及其专用载体应用

[发明专利]一种大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体及其应用-CN201310418433.4有效
发明人：卢建平;曹惠娟;张莉林;林福呈 -专利权人：浙江大学
申请日： 2013-09-13 - 公布日： 2014-01-08 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体及其应用。所述大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体为含有酵母DNA复制子和酵母筛选标记基因的双元载体。所述应用为大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体在向真菌或植物细胞转化DNA中的应用。本发明的大肠杆菌-酵母-农杆菌穿梭表达载体是世界上首次报道的、可以同时在酵母、大肠杆菌和农杆菌内复制、增殖并稳定存在的质粒，该穿梭表达载体可以直接通过农杆菌介导的方式转化真菌或植物细胞，缩短了基因操作的流程和时间
一种大肠杆菌酵母杆菌穿梭表达载体及其应用

[发明专利]一种高效表达gmd、wcaG的重组大肠杆菌及构建方法-CN202210890832.X在审
发明人：刘振云;郭涛;程丰伟 -专利权人：苏州一兮生物技术有限公司
申请日： 2022-07-27 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效表达gmd、wcaG的重组大肠杆菌的构建方法，以大肠杆菌为出发菌株，敲除其生物合成可拉酸的代谢基因wcaA,wcaB,wcaC,wcaD,wcaE和wcaF，并在gmd基因之前敲入gmd‑wcaG基因的表达调控组件，获得高效表达gmd、wcaG的重组大肠杆菌；所述gmd‑wcaG基因的调节组件包括启动子和核糖体结合位点。所述出发菌株为携带gmd‑wcaG基因的大肠杆菌。本发明适用于所有具有gmd‑wcaG基因的大肠杆菌，本底菌株可选项较多。与未改造的大肠杆菌相比，本发明构建的菌株gmd‑wcaG基因表达更强，并且由于是基因组改造，相比于现有的质粒优化表达更稳定。
一种高效表达 gmd wcag 重组大肠杆菌构建方法

[发明专利]含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法-CN201810863252.5有效
发明人：汪小锋;吴玉峰;汪卫;刘艳红;陈火晴 -专利权人：武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2018-08-01 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法。所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒为以下几种情形之一或其组合：(1)至少包含大肠杆菌分子伴侣基因和含锰离子的酶蛋白基因；(2)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因，以及过表达或抑制锰离子通道相关蛋白基因；(3)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因，以及影响胞内的锰离子浓度相关蛋白基因。通过所述大肠杆菌表达系统的构建及优化，可实现含锰离子酶蛋白的高效可溶且有活性的表达，相比传统方法效率高、纯化工艺简单、成本低，有利于含锰离子酶的工业化生产和应用。
离子重组蛋白大肠杆菌表达系统及其应用方法

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