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[发明专利]一种外周血单个核细胞的提取收集方法-CN202011252394.1在审
发明人：王晓宇;林冠妃;郭康合;李崴;蔡开婷;张万程;李秋宛;王岱桑 -专利权人：海南优尼科尔生物科技有限公司
申请日： 2020-11-11 - 公布日： 2021-03-09 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明公开了一种外周血单个核细胞的提取收集方法，包括以下步骤：1)外周血采集；2)外周血预处理；3)离心；4)提取血浆；5)血浆灭活；6)收集单个核细胞层；7)单个核细胞层离心；8)清洗；9)提取单个核细胞本发明属于细胞提取技术领域，具体是提供了一种利用Ficoll淋巴细胞分离液离心提取获得外周血单个核细胞，细胞得率高、活性高的外周血单个核细胞的分离方法。
一种外周血单个细胞提取收集方法

[发明专利]一种电转后PBMC的培养方法-CN201810129577.0在审
发明人：金华君;徐飞;刘韬;李林芳;钱其军 -专利权人：上海细胞治疗集团有限公司;上海细胞治疗研究院
申请日： 2018-02-08 - 公布日： 2019-08-16 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明提供一种电转后PBMC的培养方法，该方法包括电转人外周血单个核细胞后，先使用含人外周血单个核细胞培养液的上清液的复苏液培养该电转后的人外周血单个核细胞2‑10小时的步骤。本发明还包括使用所述复苏液复苏冻存的人外周血单个核细胞以及培养人外周血单个核细胞的方法。本发明也包括所述复苏液。本发明的复苏液能促进电转后外周血单个核细胞的生长，进而提高其活力；采用本发明的复苏液对冷冻人外周血单个核细胞进行复苏和电转后孵育，能够有效减少冷冻复苏细胞在电转后的死亡，促进细胞增殖。
人外周血单个核细胞电转复苏液复苏冷冻培养液外周血单个核细胞促进细胞增殖有效减少上清液冻存孵育细胞生长死亡

[发明专利]一种使用外周血检测抗原免疫原性的方法-CN202110049135.7在审
发明人：唐云霞;高志博;张义兴;苏小凡 -专利权人：深圳裕康医学检验实验室;深圳裕泰抗原科技有限公司
申请日： 2021-01-14 - 公布日： 2021-04-16 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：一种使用外周血检测抗原免疫原性的方法，包括：离心步骤，包括使用密度梯度离心管对外周血样本进行离心，分离得到外周血单个核细胞；多肽培养步骤，包括取部分外周血单个核细胞，培养过程中，分多次加入待测抗原多肽、培养基、细胞因子，培养得到被多肽刺激的外周血单个核细胞；树突状细胞培养步骤，包括取部分外周血单个核细胞，诱导培养，得到树突状细胞；检测步骤，将被多肽刺激的外周血单个核细胞与树突状细胞混合孵育，检测抗原多肽是否具有免疫原性通过短时间离心后，进行多肽刺激培养外周血单个核细胞，可快速检测待测抗原的免疫原性，显著简化操作步骤，缩短检测时间，并且只需少量外周血，显著降低样本的获取难度。
一种使用外周血检测抗原免疫原性方法

[发明专利]将外周血单个核细胞诱导为CIK的试剂及其所用组合物-CN201811502978.2在审
发明人：曹延粉;黄庆雷;赵伟;王培培;占天焱;沈丽;邓钺 -专利权人：北京弘润天源基因生物技术有限公司
申请日： 2018-12-10 - 公布日： 2019-04-23 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了将外周血单个核细胞诱导为CIK的试剂及其所用组合物。将外周血单个核细胞诱导为CIK的组合物由抗CD3抗体、抗CD28抗体、IL‑2、IL‑15和IL‑12组成。将外周血单个核细胞诱导为CIK的试剂包括该组合物和冻存外周血单个核细胞复苏液。将人外周血单个核细胞诱导为CIK的组合物与对照组合物相比，从不同健康志愿者获得的CIK细胞中CD3+CD56+细胞的含量提高了72‑76％，CD3+CD8+细胞的含量提高了20‑21％。该冻存外周血单个核细胞复苏液与常规复苏液相比，可显著提高冻存人外周血单个核细胞的细胞活率，使从冻存人PBMC得到的CIK中的CD3+CD56+细胞含量提高47％。
外周血单个核细胞诱导冻存复苏液细胞人外周血单个核细胞对照组合物抗CD28抗体抗CD3抗体人PBMC 健康

[发明专利]一种大鼠神经支架的构建方法-CN202011617426.3在审
发明人：孙广峰;李璐希;陶科融;游兴;张驰;刘野 -专利权人：遵义医科大学第二附属医院
申请日： 2020-12-30 - 公布日： 2021-04-06 - 主分类号： A61L27/38 文献下载
摘要：本发明属于神经支架构建技术领域，公开了一种大鼠神经支架的构建方法，包括制备外周血单个核细胞PBMCs溶液，制备脱细胞异体神经，构建脱细胞异体神经复合外周血单个核细胞的神经支架。本发明中的外周血单个核细胞的提取方便快捷，创伤小，脱细胞异体神经复合外周血单个核细胞的大鼠神经支架的构建技术不复杂，利于技术推广应用；自体外周血单个核细胞用于自体神经缺损的修复，无免疫原性、致瘤性、不涉及伦理等问题；用于自体神经缺损的修复，可以避免自体神经移植术供区感觉运动功能障碍，减少了副损伤；为构建人脱细胞异体神经复合自体外周血单个核细胞神经支架用于重建修复周围神经缺损提供了强有力的理论依据。
一种大鼠神经支架构建方法

[发明专利]一种人外周血免疫细胞库的构建方法-CN201210269737.4有效
发明人：王肇光;薛书奎;蔡平平;田甜;邢晓;李财新;陈莉 -专利权人：济南赛尔生物科技有限公司
申请日： 2012-07-30 - 公布日： 2012-10-31 - 主分类号： C40B50/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种人外周血免疫细胞库的构建方法，步骤包括：采集人外周血，分离自体血浆，分离外周血单个核细胞，由外周血单个核细胞分离单核细胞并冻存，由外周血单个核细胞分离T淋巴细胞并冻存，由外周血单个核细胞分离B淋巴细胞并冻存，由外周血单个核细胞分离NK细胞并冻存，编码入库。本发明把健康或青年人的免疫细胞分离出，并分别单独冻存，关联编号保存入库，使保存的人免疫细胞具有活性高、纯度高、使用方便的特点，并且用人自体血浆可以代替胎牛血清使用，避免了引入外源蛋白。
一种人外周血免疫细胞构建方法

[发明专利]一种外周血单个核细胞的冻存液及冻存方法-CN201210149968.1无效
发明人：刘韬 -专利权人：深圳市博泰生物医疗机构管理有限公司
申请日： 2012-05-15 - 公布日： 2012-09-19 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明提供一种外周血单个核细胞冻存液，包含10-12%(V/V)渗透性冷冻保护剂，10-14%(V/V)β-葡聚糖，8-10%(V/V)血清或血浆，64-72%(V/V)生理盐水。本发明还提供一种外周血单个核细胞冻存方法，包括：（1）将外周血单个核细胞悬浮于细胞培养液中，获得外周血单个核细胞悬液；（2）将所述外周血单个核细胞悬液与权利要求1-5中任一项所述的外周血单个核细胞冻存液按照0.9-1.1∶1的比例混匀，分装于细胞冻存管中；（3）将所述细胞冻存管放置于程序冻存盒中，先于-80℃冷冻，然后转入液氮中冻存。
一种外周血单个细胞冻存液方法

[发明专利]冻存人外周血单个核细胞的复苏液及方法-CN201810129440.5有效
发明人：金华君;徐飞;刘韬;李林芳;钱其军 -专利权人：上海细胞治疗集团有限公司;上海细胞治疗研究院
申请日： 2018-02-08 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及冻存人外周血单个核细胞的复苏液及方法，所述复苏液含有人外周血单个核细胞培养液的上清液和任选的人外周血单个核细胞的培养基。本发明的复苏方法包括在冻存的人外周血单个核细胞解冻后立即用所述复苏液制备细胞悬液并进行培养的步骤。相比采用现有方法复苏后的细胞，其活力显著提高，细胞死亡数量明显减少。
冻存人外周血单个细胞复苏方法

[发明专利]一种结核感染T细胞斑点试验样本的制备方法-CN202111267404.3在审
发明人：王莹;张燕敏;刘志华;施晓如;徐永新;谷晓辉;秦琼 -专利权人：郑州金域临床检验中心有限公司
申请日： 2021-10-29 - 公布日： 2022-03-01 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种结核感染T细胞斑点试验样本的制备方法，涉及医学检测技术领域，包括以下步骤：采集样本；外周血单个核细胞的分离和提取；外周血单个核细胞的计数；制得最终的试验样本。本发明可被用来结核感染T细胞斑点试验样本制备过程中完成对外周血单个核细胞的提取和计数。在提取和计数过程中能够减少对人员经验、精力、体力的要求，简单、准确地提取和计数结核感染T细胞斑点试验过程中外周血单个核细胞；所述恒速细胞提取装置，采用防呆设计的理念，使人员手持装置插入外周血单个核细胞层上方，即可通过溶液浓度发射的光信号控制对细胞提取的速度，进而准确地提取结核感染T细胞斑点试验过程中外周血单个核细胞层。
一种结核感染细胞斑点试验样本制备方法

[发明专利]一种细胞冻存液及其制备方法和应用-CN201710072813.5在审
发明人：陈晨;林科佳;马冬磊;罗晓玲;魏志璋;王宇环;魏宗科 -专利权人：深圳市合一康生物科技股份有限公司
申请日： 2017-02-10 - 公布日： 2017-06-13 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及免疫细胞冻存及复苏技术领域，特别涉及人体外周血单个核细胞低温冻存与复苏后再培养的方法，本发明的提高外周血单个核细胞冻存后再培养活性的方法，包括冻存人外周血单个核细胞时冻存液、冻存密度的选择以及复苏时保护液的选择，通过筛选合适的冻存液和冻存密度保存了外周血单个核细胞的细胞活性，复苏时选择合适的保护液，有利于更好的保护细胞的活性，从而大大提高了冻存的外周血单个核细胞的活性和利用率。
一种细胞冻存液及其制备方法应用

[发明专利]免疫荧光法检测HLA-DR表达量评估PBMC抗原呈递能力的方法-CN201410098829.X有效
发明人：刁宏燕;陈佳宁;魏应凤;崔光莹;丁玉龙 -专利权人：浙江大学
申请日： 2014-03-18 - 公布日： 2014-06-18 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：该方法包括：从感染甲型H7N9的患者外周血中分离出外周血单个核细胞；通过免疫荧光检测HLA-DR的表达量；当HLA-DR占外周血单个核细胞PBMC的比例为27.56%～37.10%时，表示外周血单个核细胞抗原呈递能力处于正常范围；当HLA-DR占外周血单个核细胞PBMC的比例低于27.56%时，表示外周血单个核细胞呈递能力弱。本发明通过检测感染甲型H7N9的患者外周血液内HLA-DR的表达量来指示患者外周血单个核细胞的抗原提呈能力，能够更直观精准地提示患者感染的严重程度，为后期的诊治工作提供数据支持。
免疫荧光检测 hla dr 表达评估 pbmc 抗原呈递能力方法

[发明专利]一种异体外周血单个核细胞体外分离试剂盒及使用方法-CN201510183426.X在审
发明人：王盛;齐湘杰;王丽 -专利权人：王盛
申请日： 2015-04-19 - 公布日： 2015-07-22 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及一种异体外周血单个核细胞高纯度、高回收率体外分离试剂盒及使用方法，采用本试剂盒分离的异体单个核细胞可用于免疫治疗不明原因习惯性流产。所述试剂盒包括试剂Ⅰ：外周血稀释液，试剂Ⅱ：红细胞沉淀液，试剂Ⅲ：单个核细胞分层液，试剂Ⅳ：单个核细胞洗涤液。采用所述试剂盒进行异体外周血单个核细胞分离的步骤包括：抗凝血预离心、红细胞初反应、红细胞沉淀、单个核细胞分层液两步分离、单个核细胞二次纯化、检菌、单个核细胞冻存。采用本发明技术可使单个核细胞回收率可达到90%以上，纯度可达到95%以上，存活率达到98%以上，大大提高了外周血单个核细胞使用效率；通过抗凝血预离心步骤，去除血浆，与常规分离技术相比，降低了分离试剂的使用剂量
一种异体外周血单个细胞体外分离试剂盒使用方法

[发明专利]一种外周血单个核细胞的提取收集方法-CN202211303889.1在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：范德里希（上海）生物科技有限公司
申请日： 2022-10-24 - 公布日： 2022-12-27 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及一种外周血单个核细胞的提取收集方法。采用的技术方案是：采用Ficoll离心法提取外周血单个核细胞，加入D‑Hanks溶液，提高分层效果，加入不同的抗凝剂，验证外周血单个核细胞的提取效果，加入微小核糖核酸，提高单个核细胞的增值能力，提高其生物活性本发明的有益效果：通过采用肝素和EDTA的及混合液作为抗凝剂，加入甘草制备的微小核糖核酸，能够进一步提高单个核细胞的增值能力，提高单个核细胞分离提取的活性。
一种外周血单个细胞提取收集方法

[发明专利]外周血单个核细胞中祛除低密度粒细胞的方法-CN201610068790.6在审
发明人：张思功 -专利权人：兰州大学第二医院;张思功
申请日： 2016-02-01 - 公布日： 2017-08-08 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及外周血单个核细胞中祛除低密度粒细胞的方法，本发明根据淋巴细胞是悬浮细胞，而低密度粒细胞更容易贴壁生长的特点，对分离的外周血单个核细胞在培养板中静置培养1小时，利用低密度粒细胞主动贴壁的特点将低密度粒细胞从外周血单个核细胞中除掉，解决了现有的祛除外周血单个核细胞中低密度粒细胞的方法无法快捷有效地将低密度粒细胞祛除，且过程复杂的问题，本发明工艺简单、易于操作、成本低。
外周血单个细胞祛除密度粒细胞方法

[发明专利]一种外周血单个核细胞的分离及培养方法-CN202010748352.0在审
发明人：黄宁;郑永唐;郑昌博;杨柳萌;罗荣华;韦海容;王婷;李俊洁 -专利权人：昆明医科大学
申请日： 2020-07-30 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明提供一种外周血单个核细胞的分离及培养方法，涉及生物技术细胞培养领域。该外周血单个核细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：S1.采集外周血；S2.离心分离；S3.提取外周血单个核细胞；S4.对外周血单个核细胞进行纯化；S5.制备细胞培养基；S6.进行细胞培养；S7.进行保存通过设置有ALK抑制剂、GSK‑3抑制剂，可以对细胞培养过程中的细胞病变进行抑制，阻止病变细胞过度活化、进行快速增值，在培养过程中没有添加动物血清，减少在培养过程中，从动物身上得到的病毒的可能，保证了培养过程中的安全，在分离完成后，对外周血单个核细胞进行多次清洗与纯化，使培养时的细胞中基本不含有其他杂质细胞，使培养的细胞较为纯净。
一种外周血单个细胞分离培养方法

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