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[发明专利]一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法-CN201110249842.7有效
发明人：苏建民;张涌;王勇胜 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2011-08-29 - 公布日： 2011-12-28 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法，将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合之后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚用1μM的Oxamflatin处理牛体细胞克隆胚胎12h，可以显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎。
一种基于体细胞移植构建克隆处理方法

[发明专利]处理牛体细胞克隆胚的方法-CN201710805551.9有效
发明人：许晓椿;郭春明;马毅;王小武;郭晶;迟大明 -专利权人：天津博裕力牧科技有限公司;天津中科博雅生物育种研究有限公司
申请日： 2017-09-08 - 公布日： 2019-11-01 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明公开了处理牛体细胞克隆胚的方法。具体的说，该方法包括以下步骤：1)将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚进行激活处理；2)牛体细胞克隆胚在进行激活处理后，转移到G1.3培养液中培养本发明还涉及在牛体细胞克隆胚的激活过程中使用的培养液以及在牛体细胞克隆胚体外培养过程中使用的培养液。本发明方法呈现如本发明说明书所述优异技术效果。
牛体细胞克隆培养液激活处理电融合激活过程技术效果卵母细胞胚体去核移植融合成功

[发明专利]哺乳动物体细胞克隆方法和使用的培养液-CN201710806337.5有效
发明人：许晓椿;王小武;郭晶;迟大明;钟原;王娜 -专利权人：天津博裕力牧科技有限公司
申请日： 2017-09-08 - 公布日： 2019-11-08 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明公开了一种哺乳动物例如牛或犬或羊的体细胞克隆方法和使用的培养液。其中哺乳动物体细胞克隆的方法包括以下处理哺乳动物体细胞克隆胚的步骤：1)将待移植的哺乳动物体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合后1h，挑选成功融合的哺乳动物体细胞克隆胚进行激活处理；2)哺乳动物体细胞克隆胚在进行激活处理后
哺乳动物体细胞培养液克隆激活处理电融合体细胞克隆哺乳动物技术效果卵母细胞去核移植融合成功

[发明专利]一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体及方法-CN202211457317.9在审
发明人：刘鑫;苗义良;周凯;王婷婷;张霞 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2022-11-21 - 公布日： 2023-04-11 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体及方法，涉及哺乳动物体细胞克隆技术领域。在猪体细胞克隆胚电激活后5h，通过向克隆胚显微注射LEUTX的mRNA，可以有效增强体细胞克隆胚组蛋白乙酰化H3K27ac这一表观遗传修饰的富集水平，显著促进猪体细胞克隆囊胚的体外发育，胚胎移植后克隆猪的出生率也显著提高
一种基于表达转录因子提高克隆效率载体方法

[发明专利]一种动物体细胞克隆方法-CN200710177647.1有效
发明人：戴蕴平;李宁;刘颖;王莉莉;王海平;李荣;丁方荣;李京;李松 -专利权人：戴蕴平;李宁;北京济普霖生物技术有限公司
申请日： 2007-11-19 - 公布日： 2008-05-21 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种动物体细胞克隆方法。该动物体细胞克隆方法，是将经体外受精得到的处于8－16细胞期的4倍体卵裂球移入8－16细胞期的体细胞克隆胚内得到复合胚，培养该复合胚得到克隆动物。本发明创造性地改变滋养层细胞的来源，将4倍体的体外受精(IVF)的卵裂球放入到8－16细胞期的克隆胚胎内，使其能够发育成为滋养层细胞，进而改善胎盘的质量，改善胎儿发育条件，提高了克隆胚胎的妊娠率，降低流产率和难产率，从而大大提高了体细胞克隆效率。由于胎儿是由2倍体细胞构成，4倍体卵裂球细胞只能形成胎盘而不具有发育成为胎儿的可能性，所以用此方法将不会对克隆动物个体本身造成影响。
一种动物体细胞克隆方法

[发明专利]一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体、细胞及方法-CN201511025413.6有效
发明人：张涌;刘鑫;苏建民;高明清;王勇胜;孙洪政 -专利权人：西北农林科技大学;杨凌科元克隆股份有限公司
申请日： 2015-12-31 - 公布日： 2019-04-05 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体、细胞及方法。本发明提供的载体包括阻遏物表达载体和含有阻遏操纵子的表达载体，在转染时将两者共转染到供体细胞中；所述的含有阻遏操纵子的表达载体中插入有牛KDM4B或牛KDM4C基因。将阳性转染的细胞作为供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚培养至36h时，诱导表达牛KDM4B和KDM4C。本发明可以有效减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，从而显著提高后期牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎，胚胎移植后克隆牛的出生率也显著提高。
一种基于组蛋白甲基化水平修饰提高克隆效率载体细胞方法

[发明专利]利用牛体细胞核移植克隆胚胎的方法-CN200810115821.4无效
发明人：于孟飞;易建明;高国龙;杨利国 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2008-06-27 - 公布日： 2008-11-12 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明属于哺乳动物繁殖技术领域，具体涉及一种利用牛体细胞获得克隆胚胎的方法。公开了一种简单高效生产牛克隆胚胎的方法。根据猪体细胞膜在注入卵胞质内会在30min后自动溶解消失的研究成果，在牛中提出采用不破膜的全细胞为供体进行全细胞胞质内直接注射构建牛克隆胚胎；从而简化了体细胞核移植的操作流程。发明特征是：(1)牛卵丘－卵母细胞复合体的采集与培养；(2)卵母细胞的去核；(3)供体细胞的制备；(4)共培养细胞单层的制备；(5)重构胚的构建；(6)重构胚的激活；(7)重构胚的培养等。本发明最大的特点是易于操作、步骤简单、结果稳定，为牛体细胞核移植技术的推广以及进一步研究提供了一种新的思路和方法。
利用体细胞移植克隆胚胎方法

[发明专利]利用体细胞克隆制备克隆马胚胎的方法-CN202110975206.6在审
发明人：米继东;赵建平;郑敏 -专利权人：北京希诺谷生物科技有限公司
申请日： 2021-08-24 - 公布日： 2021-12-31 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用体细胞克隆制备克隆马胚胎的方法，所述方法包括：体细胞的分离培养；马卵母细胞成熟培养；制备去核的卵母细胞；脱去卵母细胞的透明带，将供体细胞和无透明带的胞质体粘在一起；将供体细胞核导入去核卵母细胞的细胞质中；激活融合的重构胚；将克隆胚胎体外培养至囊胚；将囊胚冷冻保存。本发明提供的方法可以构建稳定成熟的克隆马胚胎生产和保存技术平台，为克隆马商业化生产奠定基础。
利用体细胞克隆制备胚胎方法

[发明专利]基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞及方法-CN201711322629.8有效
发明人：张涌;刘军;韩成全;苏建民;毛廷超;王勇胜;康健 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2017-12-12 - 公布日： 2019-02-01 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体，在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞，药物诱导表达山羊TET3，将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平，纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象，从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量，可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎，胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高
山羊供体细胞体细胞克隆胚胎表达载体克隆细胞修饰体细胞克隆胚甲基化水平操纵基因克隆胚胎卵母细胞胚胎移植阳性细胞药物诱导诱导表达阻遏蛋白融合电融合共转染甲基化地体去核转染筛选发育纠正成功生产

[发明专利]基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞及方法-CN201711322629.8有效
发明人：张涌;刘军;韩成全;苏建民;毛廷超;王勇胜;康健 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2017-12-12 - 公布日： 2019-02-01 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体，在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞，药物诱导表达山羊TET3，将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平，纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象，从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量，可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎，胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高
山羊供体细胞体细胞克隆胚胎表达载体克隆细胞修饰体细胞克隆胚甲基化水平操纵基因克隆胚胎卵母细胞胚胎移植阳性细胞药物诱导诱导表达阻遏蛋白融合电融合共转染甲基化地体去核转染筛选发育纠正成功生产

[发明专利]Acaciamangium的体细胞胚发生再生-CN00811891.4无效
发明人：谢德玉;洪焰 -专利权人：分子农业生物学院
申请日： 2000-06-21 - 公布日： 2002-11-27 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明涉及体细胞胚产生领域,尤其通过体细胞发生再生Acaciamangium的方法。更特别的,本发明涉及通过在愈伤组织诱导培养基上培养未成熟合子胚的外植体使之生长为胚发生组织而再生Acaciamangium植物的方法。胚发生组织在体细胞胚成熟培养基上和萌发培养基上继续培养。将萌发胚进一步转化为驯化植物,以在田间种植。此方法特别适于产生克隆种植原种,用于重新造林。
acaciamangium 体细胞发生再生

[发明专利]一种基于体细胞核移植技术构建三倍体猪的方法-CN202310428547.0在审
发明人：魏红江;角德灵;郭建雄;魏太云 -专利权人：云南农业大学
申请日： 2023-04-20 - 公布日： 2023-08-25 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于体细胞核移植技术构建三倍体猪的方法。本发明在体外建立二倍体猪细胞系，以此为核供体进行体细胞核移植，经电融合、电激活后构建克隆胚，检测其克隆胚的体外发育潜力，进一步移植至代孕母猪中继续发育，适时根据B超监测结果获取胎儿，建立胎儿成纤维细胞系进行倍性鉴定及核型分析以三倍体猪胎儿成纤维细胞为核供体再次体细胞核移植，经电融合、电激活后构建克隆胚，检测其克隆胚的体外发育能力，并进一步移植至代孕母猪体内，生产三倍体猪。
一种基于体细胞移植技术构建三倍方法

[发明专利]提高牛体细胞克隆胚和体外受精胚的发育质量的培养液和培养方法-CN201711117369.0在审
发明人：张景程;张涌 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2017-11-13 - 公布日： 2018-04-17 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明提供了一种提高牛体细胞克隆胚和体外受精胚的发育质量的培养液和培养方法，培养液包括体积分数2％的BME、体积分数1％的MEM、1mmol/L的谷氨酰胺、8mg/mL的BSA、50μg/mL的庆大霉素及50μg/mL的头孢霉素，在体外培养牛胚胎到第96h后，添加体积分数5％的KSR；利用上述培养液进行牛体细胞克隆胚及体外受精胚体外培养，结果显示囊胚发育率和质量均显著高于对照组，运用本发明可以高效率的获得牛体细胞克隆胚胎或体外受精胚胎
提高体细胞克隆体外受精发育质量培养液培养方法

[发明专利]一种水牛体细胞克隆的方法-CN200510019068.5无效
发明人：石德顺;陆凤花;杨素芳;韦英明 -专利权人：广西大学
申请日： 2005-07-06 - 公布日： 2006-02-15 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：一种水牛体细胞克隆的方法，其工艺步骤为：在成熟培养液中添加牛卵泡液和上皮细胞生长因子培养受体卵母细胞，在纺锤体图像系统下去核；用DNA合成的抑制剂Aphidicolin培养处理供体细胞，再饥饿培养；采用离子霉素和6－二甲氨基嘌呤联合激活重组胚，用改良的TCM199加发情牛血清进行胚胎的体外的培养。用本发明的方法进行水牛体细胞克隆，已获得成功，并获得了世界首例成年体细胞克隆水牛。
一种水牛体细胞克隆方法

[发明专利]一种利用微小核糖核酸提高牛克隆效率的方法-CN201610537461.1有效
发明人：张涌;张景程;屈鹏翔;王勇胜 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2016-07-08 - 公布日： 2018-12-04 - 主分类号： C12N15/877 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用微小核糖核酸提高牛克隆效率的方法，在体细胞核移植的电融合液中加入bta‑miR‑125b mimic，可以有效地导入到胚胎中，在避免产生转染的二次损伤的同时，还能有效地减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量。
一种利用微小核糖核酸提高克隆效率方法

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