本发明属于水产生物技术领域,公开了一种用于中华鳖遗传性别鉴定的分子标记及方法,采用RAD技术对中华鳖雌雄个体进行测序,筛选雌雄特异性片段;根据雌雄特异性片段进行雌性基因组Walking,获得6532bp的特异性片段SEQ ID NO:1;基于特异性片段设计引物,进行引物筛选和验证获得特异性引物;采集中华鳖裙边组织,提取中华鳖基因组DNA,利用引物对在中华鳖个体中进行扩增;扩增结果进行电泳检测;进行遗传性别的鉴定本发明解决了目前尚未见到中华鳖性别特异性标记用于遗传性别的鉴定,具有原创性。本发明准确鉴定成功率达到100%。