[发明专利]一种细胞色素P450 BM3突变体及其在醋酸群勃龙合成中的应用有效

专利信息
申请号: 202110721653.9 申请日: 2021-06-28
公开(公告)号: CN113528472B 公开(公告)日: 2023-01-24
发明(设计)人: 李爱涛;彭雅琴;高成华;赵晶;张铮斌;李纯 申请(专利权)人: 湖北大学;浙江仙居君业药业有限公司
主分类号: C12N9/02 分类号: C12N9/02;C12N15/53;C12P33/10
代理公司: 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 代理人: 万青青
地址: 430062 湖北*** 国省代码: 湖北;42
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明公开了一种细胞色素P450 BM3突变体及其在醋酸群勃龙合成中的应用,所述细胞色素P450 BM3突变体选自:突变体LG‑23/T438S,LG‑23/T438A和/或LG‑23/T438G,氨基酸序列分别如SEQID NO:1,SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。经验证所述细胞色素P450 BM3突变体和LG‑23都具有甾体化合物11α羟基化催化活性,可应用于醋酸群勃龙的合成中。本发明提供的醋酸群勃龙合成方法,不仅简化药物合成步骤,提高催化选择性,减少副产物提高产率,并且反应条件温和,成本低廉,绿色环保高效,对推动我国甾体药物的开发进程有着重要的应用价值。
搜索关键词: 一种 细胞 色素 p450 bm3 突变体 及其 醋酸 群勃龙 合成 中的 应用
【主权项】:
暂无信息
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于湖北大学;浙江仙居君业药业有限公司,未经湖北大学;浙江仙居君业药业有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/202110721653.9/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 一种黄烷酮C环裂解还原酶CsFCR及其编码基因和应用-202311027571.X
  • 邹祥;张笑;徐兴然 - 西南大学
  • 2023-08-15 - 2023-10-27 - C12N9/02
  • 本发明涉及生物技术领域,公开了一种黄烷酮C环裂解还原酶CsFCR及其编码基因和应用,黄酮裂解还原酶可将黄烷酮类化合物中C环进行裂解还原;通过在重组表达系统中高效地转化包括柚皮素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷等不同黄烷酮活性物质,从而获得另一种天然产物结构即二氢查耳酮活性化合物,实现化合物的定向生物转化。
  • 一种烯烃还原酶突变体及其在制备(R)-4-丙基二氢呋喃-2(3H)-酮中的应用-202310908302.8
  • 许国超;阮梦雨;倪晔 - 江南大学
  • 2023-07-24 - 2023-10-27 - C12N9/02
  • 本发明公开了一种烯烃还原酶突变体及其在制备(R)‑4‑丙基二氢呋喃‑2(3H)‑酮中的应用,属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的烯烃还原酶突变体通过将如SEQ ID NO.1所示出发氨基酸序列第247位脯氨酸突变为丙氨酸得到。本发明提供的制备方法中,由烯烃还原酶突变体催化,构建NAD(P)+/NAD(P)H辅酶循环系统,制备目标产物布瓦西坦中间体(R)‑4‑丙基二氢呋喃‑2(3H)‑酮,其产物的ee值达到99%以上,具有良好的工业应用潜力。
  • 漆酶突变体及其应用-202311225490.0
  • 关菲菲;田健;黄火清;宝雅茹;罗会颖;姚斌;伍宁丰;刘晓青;张若晗 - 中国农业科学院生物技术研究所
  • 2023-09-21 - 2023-10-27 - C12N9/02
  • 本发明公开了漆酶突变体及其应用。本发明将氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的野生型漆酶13B22分别进行D511E、V435I、I88L、H436E、G430S、V378I、I424F、N367D、I129L、W502F、H439Y或S248A单位点突变获得了12个单位点突变体,所得到的突变体酶活较野生型漆酶有不同提升,其中,突变体D511E较野生型漆酶的最适温度以及酶活有明显提升并且对于有毒化合物的降解效果有显著改善。本发明进一步提供了突变体的编码基因,含有所述突变体的编码基因的重组表达载体、宿主细胞以及制备重组漆酶突变体的方法。本发明所提供的漆酶突变体降解毒性化合物中具有应用前景。
  • 乙醛氧化酶突变体及其应用-202310979295.0
  • 黄火清;柏映国;田健;朱子健;姚筱暄;霍艺杰;尚鹏 - 北京易醒生物科技有限公司;北京益醒生物科技有限公司
  • 2023-08-05 - 2023-10-27 - C12N9/02
  • 本发明公开了乙醛氧化酶突变体及其应用。所述突变体是将来源于白腐菌的乙醛氧化酶进行V33F、V122L、E158T、L163I、H164D、T249S、R287T、D289T或G518D中的任何一种单位点突变所获得的突变体;酶活复筛结果显示,突变体G518D酶活最高。本发明利用气相色谱分别对野生型以及突变体G518D在同样条件下对底物乙醛的降解程度和生成物乙酸进行检测,检测结果显示,相比于野生型,突变体G518D催化底物乙醛降解得到产物乙酸生成量明显高于野生型乙醛氧化酶,底物乙醛降解的程度也明显高于野生型乙醛氧化酶。本发明所筛选得到的乙醛氧化酶突变体在降解醛类物质等方面具有应用前景。
  • 一种类黄酮类化合物羟基化酶及其构建方法和应用-202210332060.8
  • 袁其朋;孙新晓;王红艳;申晓林;王佳;蒋瑞霞;邢博闻 - 北京化工大学
  • 2022-03-31 - 2023-10-24 - C12N9/02
  • 本发明提供了一种类黄酮类化合物羟基化酶,包括Ro.HpaBC或其突变体Ro.HpaBCMUT,其中的Ro.HpaB或Ro.HpaBMUT可以提高类黄酮类化合物的邻羟基化效率,尤其是突变体中的Ro.HpaBMUT能够减少与底物的空间位阻,使其对底物的催化活性较高,使得突变体和底物能更好地结合和反应,提高了类黄酮类化合物生物合成效率,有效的降低生产的时间和经济成本,具有极大的应用潜力,为其进一步的工业化应用奠定基础。本发明还提供了一种上述类黄酮类化合物羟基化酶的构建方法。本发明还提供了一种上述类黄酮类化合物羟基化酶在类黄酮类化合物邻羟基化反应中的应用。
  • 一种将脂肪酸转化为β-羟基脂肪酸的人工生物催化剂-202110656657.3
  • 王喜庆;严文亮;陈浩 - 合肥生融生物科技有限公司
  • 2021-06-11 - 2023-10-24 - C12N9/02
  • 本发明公开了一种将脂肪酸转化为β‑羟基脂肪酸的人工生物催化剂,属于蛋白质工程领域。本发明脂肪酸β‑羟基化酶P450BSβ突变体是由野生型脂肪酸羟基化酶P450BSβ的氨基酸序列在第78位、85位、170位和290位突变得到的。本发明构建的生物催化剂能够以高度区域选择性和对映体选择性的方式氧化脂肪酸的β位C‑H基团。该生物催化剂具有高反应活性,以廉价的过氧化氢作为氧化剂,将底物C11‑C18链长的直链饱和脂肪酸以及油酸和亚油酸不饱和脂肪酸转化为相应的(R)‑β‑羟基脂肪酸。
  • 一种烯烃还原酶突变体及高效合成(R)-香茅醛的方法-202310729705.6
  • 徐美娟;饶志明;张杰;熊涛;张显 - 江南大学
  • 2023-06-19 - 2023-10-20 - C12N9/02
  • 本发明公开了一种烯烃还原酶突变体及高效合成(R)‑香茅醛的方法,属于生物技术领域。本发明的烯烃还原酶突变体N31‑CgOYE,该突变酶的催化活性相较于原始酶提高了4.86倍,接着通过半理性设计获得突变体N31‑CgOYEI81L/W128A/H190A,其催化底物(E/Z)‑柠檬醛合成香茅醛的比酶活为7.6U·mg‑1是CgOYE的4.27倍,其ee(R)以及转化率分别为99.0%和99.4%。将本发明构建的烯烃还原酶突变体偶联Bacillus subtilis来源葡萄糖脱氢酶用于生产(R)‑香茅醛,显著提高了(R)‑香茅醛的生产可持续性,可使反应24h(R)‑香茅醛达到24.528g/L。
  • 热稳定性提升的FDH突变体及其参与的辅酶再生系统-202310571478.9
  • 吴倩倩;管佳威;邹梨;刘作洋 - 杭州力文所生物科技有限公司
  • 2023-05-18 - 2023-10-20 - C12N9/02
  • 本发明公开了一种热稳定性提升的FDH突变体及其参与的辅酶再生系统,本发明利用力文所开发的基于深度学习算法的蛋白质设计平台‑Lésign对野生型甲酸脱氢酶的序列进行改进,并进行生物实验验证,AI计算结果和生物实验结果表明,得到的突变体的热稳定性优于野生型。特别是本发明进一步限定的组合突变得到的突变体的人稳定性表现得较为优异,在60℃孵育90min后的剩余酶活基本上能达到野生型的250%。上述突变体参与的NAD+‑NADH反应体系可以在较高温度下反应,该反应体系的催化效率可以明显提高,适于工业推广。
  • 蛋白可溶性表达提高的FDH突变体及其编码基因-202310571222.8
  • 刘薇;王浩博;陈波 - 杭州力文所生物科技有限公司
  • 2023-05-18 - 2023-10-20 - C12N9/02
  • 本发明公开了一种蛋白可溶性表达提高的FDH突变体及其编码基因,本发明通过Lésign平台对野生型甲酸脱氢酶进行序列改造。计算得到的突变体RP31~37的蛋白可溶性表达量和热稳定性均有较大提升。特别是RP31和RP33,可溶性表达量均达到了野生型的300%以上,在60℃孵育90min后的剩余酶活均达到了野生型的200%左右。因此,本发明本发明突变后的甲酸脱氢酶在相同发酵条件下可以得到更多可用于催化的酶量,同时突变体参与的NAD+‑NADH反应体系可以在较高温度下反应,该反应体系的催化效率可以明显提高,适于工业推广。
  • 高效合成氢化可的松的11β-羟化重组丝状真菌及其应用-202310000666.6
  • 刘晓光;杨滨瑞;路福平;毛淑红;李金红 - 天津科技大学
  • 2023-01-03 - 2023-10-17 - C12N9/02
  • 本发明提供了高效合成氢化可的松的11β‑羟化重组丝状真菌及其应用,属于基因工程和酶工程技术领域;本发明将来源于新月弯孢霉的C11β‑羟化酶CYP5103B6突变体T291Y/M365A/A372F在缺失11α‑羟化酶CYP68J5的赭曲霉菌株中过表达,获得的赭曲霉重组菌能够高效转化底物11‑脱氧皮质甾醇生成氢化可的松。所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。底物11‑脱氧皮质甾醇的投料量为3g/L,转化72h,产物氢化可的松的得率达到78%。本发明为研究开发高效C11β‑羟化11‑脱氧皮质甾醇生产氢化可的松工艺提供了宝贵的工业菌种和技术方法。
  • 一种4-羟基苯乙酸-3-羟化酶突变体-202310870985.2
  • 赵伟睿;张前超;胡升;梅乐和;黄俊;吕常江 - 浙大宁波理工学院
  • 2023-07-14 - 2023-10-17 - C12N9/02
  • 本发明公开了一种4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体,所述4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体由大肠杆菌(Escherichia coli)来源的野生型4HPA3H酶经过突变所得,野生型4HPA3H酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,突变方式为以下一种:(1)I157L;(2)A211D;(3)I157L/A211D。本发明4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体,其中1157L、A211D两种突变体全细胞催化白藜芦醇活性相对于WT提高了1.84和2.07倍,同时将两个位点进行叠加所得的突变体I157L/A211D全细胞催化白藜芦醇活性相较于WT提高了2.46倍。
  • 一种耐高温重组突变型SOD及其编码基因和应用-202111456305.X
  • 聂作明;青立军;盖其静;周始煜 - 浙江安各洛生物技术有限公司
  • 2021-12-01 - 2023-10-17 - C12N9/02
  • 本发明公开的是一种耐高温重组突变型SOD及其编码基因和应用,以耐高温菌Acidilobus saccharovorans的SOD序列为基础,将其编码蛋白的氨基酸序列中164L突变为I以及168V突变为E,从而提高SOD的活性、热稳定性、耐酸碱性以及耐胰蛋白酶消化性,其活性至少提高60%以上,活性显著高于现有技术生产的SOD的活性,耐高温突重组变型SOD包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列,还提供了在制备超氧化物歧化酶产品中的应用,特别是在医药、食品、化妆品等行业,本发明具有突变酶活显著提高,耐胰蛋白酶消化,具有较高蛋白稳定性,耐高温等技术特点。
  • 一种提取超氧化物歧化酶的方法-202311038405.X
  • 张成林 - 张成林
  • 2023-08-17 - 2023-10-13 - C12N9/02
  • 本发明涉及一种提取超氧化物歧化酶的方法,包括有粉碎榨汁工艺、固液分离工艺、提取浓缩工艺和固定化修饰工艺;通过双相酶法提取和酶固定化修饰技术生产的植物SOD产品,所述固定化修饰技术是将SOD粗酶经固定化优化技术制得固定化SOD,再经进一步提纯修饰制得高活性SOD所需原料SOD菊种植栽培采用生态保护系统,本方法利用生态保护系统,实现人工规模化规范化种植、无化学农药污染、纯天然、绿色环保的有机应用,是一种植物超氧化物歧化酶(SOD)提取方法,即是从绿色植物中可食部分提取的精华,无任何副作用。
  • 一种植物来源的塑料降解酶及其体外降解PP塑料的方法-202210850985.1
  • 李永;谭前龙;陈文韬;唐杰;李自迁 - 中南林业科技大学
  • 2022-07-19 - 2023-10-13 - C12N9/02
  • 本发明公开了一种植物来源的塑料降解酶及其体外降解PP塑料的方法,属于酶工程技术领域。本发明的植物来源的塑料降解酶为植物来源的HIS1蛋白酶。体外降解PP塑料的方法,步骤如下:利用RT‑PCR技术从植物中克隆HIS1基因;通过平末端克隆技术将基因连接到原核表达质粒中;导入Bl21(DE3)大肠杆菌表达平台进行表达并纯化出HIS1蛋白;在体外构建酶反应环境对PP塑料进行降解。本发明提供的HIS1蛋白可以有效实现PP塑料的降解,为PP塑料生物降解提供了一条以植物酶降解塑料的新思路,具有良好的应用前景。
  • 一种P450酶突变体、单质粒三酶共表达系统及其在骨化二醇合成中的应用-202310642328.2
  • 王华磊;柳沁怡;沈亚领 - 华东理工大学
  • 2023-06-01 - 2023-10-13 - C12N9/02
  • 本发明公开了一种P450酶突变体、单质粒三酶共表达系统及其在骨化二醇合成中的应用。P450酶突变体包括:以SEQ ID NO.1所示野生型P450酶CYP109E1为模板,分别对第78位的T突变或第81位的G突变,形成的突变体T78A、T78V、T78L和T78I,G81V和G81M,以及同时对第78位的T和第81位的G突变,形成的突变体T78L/G81M。本发明还通过构建一种P450酶突变体和氧化还原伴侣的单质粒三酶共表达系统,提高了P450酶羟基化反应中的电子传递效率,可在温和条件下以更高效率合成骨化二醇,解决了P450酶催化合成骨化二醇催化效率以及活力低的问题,具有重要的工业应用价值。
  • 硫醚单加氧酶突变体及其在制备手性拉唑药物中的应用-202310650468.4
  • 郁惠蕾;周敏;秦鹏;耿强;张志钧 - 华东理工大学
  • 2023-06-02 - 2023-10-10 - C12N9/02
  • 本发明属于生物工程技术领域,涉及一种硫醚单加氧酶突变体;编码所述硫醚单加氧酶突变体的核酸,含有该核酸的重组表达载体,含有该重组表达载体的重组表达转化体;以及所述重组硫醚单加氧酶突变体在制备手性拉唑药物中的应用。与其它制备光学纯拉唑类药物的生物催化剂相比,本发明提供的硫醚单加氧酶突变体具有蛋白表达量高、催化活性高、溶剂耐受强、热稳定性好、产品光学纯度高、产率高等优势,在工业应用中显示出广泛的应用前景。
  • 一种生产棘白霉素类药物的基因工程菌及其应用-202210314827.4
  • 陈少欣;卫腾云;杨松柏;吴远杰 - 上海医药工业研究院有限公司;中国医药工业研究总院有限公司
  • 2022-03-28 - 2023-10-10 - C12N9/02
  • 本发明公开了一种生产棘白霉素类药物的基因工程菌及其应用。所述基因工程菌包括一种基因组合,所述基因组合包括来源于丝状真菌Coleophoma empetri中编码P450单加氧酶CEP450‑3的基因和编码磺酰基转移酶CESUL的基因。本发明还公开了一种棘白霉素类化合物,其组成环脂肽的高酪氨酸处具有磺酰氧基的修饰。本发明还公开了通过培养所述基因工程菌来制备所述棘白霉素类化合物的方法,以及所述基因组合、重组表达载体和基因工程菌在生产所述棘白霉素类化合物中的应用。本发明的基因工程菌能生产具有磺酰氧基修饰的新化合物PBS和EcBS,新化合物的水溶性和抗菌活性均分别优于原未经磺酰氧基修饰的化合物PB0和EcB。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top