[发明专利]一种NAMPT基因修饰的人脐带间充质干细胞外泌体的制备方法在审
申请号: | 202110552148.6 | 申请日: | 2021-05-20 |
公开(公告)号: | CN113234759A | 公开(公告)日: | 2021-08-10 |
发明(设计)人: | 周琦琦;崔恒宓;刘洋洋 | 申请(专利权)人: | 扬州大学 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N5/10;C12N15/54 |
代理公司: | 扬州苏中专利事务所(普通合伙) 32222 | 代理人: | 沈志海 |
地址: | 225009 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
权利要求书: | 暂无信息 | 说明书: | 暂无信息 |
摘要: | 本发明涉及一种NAMPT基因修饰的人脐带间充质干细胞外泌体的制备方法,包括以下步骤:1)、针对人AAVS1位点设计sgRNA并构建sgRNA‑CAG‑hCas9载体;2)、将sgRNA‑CAG‑hCas9载体转染至293T细胞验证sgRNA切割效率;3)、构建含NAMPT基因、抗性基因neo、转录终止序列BGH polyA、启动子EF‑1A重组载体;4)、将步骤2)中切割效率好的sgRNA‑CAG‑hCas9载体与步骤3)中构建的重组载体共转染间充质干细胞,G418筛选得到稳转细胞系;5)、收集高表达NAMPT稳转细胞系培养基,利用外泌体试剂盒提取,得到高表达NAMPT基因的人脐带间充质干细胞外泌体。通过本发明,较于慢病毒构建方法更加安全。 | ||
搜索关键词: | 一种 nampt 基因 修饰 脐带 间充质 干细胞 外泌体 制备 方法 | ||
【主权项】:
暂无信息
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