[发明专利]一种新的基于重叠延伸PCR的载体构建方法以及试剂盒有效
| 申请号： | 202110163385.3 | 申请日： | 2021-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN112852851B | 公开（公告）日： | 2023-07-04 |
| 发明（设计）人： | 刘亮;袁玲;刘莎 | 申请（专利权）人： | 北京华青创想科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/64 | 分类号： | C12N15/64 |
| 代理公司： | 北京之于行知识产权代理有限公司 11767 | 代理人： | 何志欣 |
| 地址： | 100000 北京市海*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种新的基于重叠延伸PCR的载体构建方法：(1)根据目的基因和目的载体的序列设计第一轮PCR扩增引物对，上游引物5’端部分为目的载体上目的基因插入位置之前的20～35bp同源臂序列，3’端部分为目的基因扩增特异引物；下游引物5’端部分为目的载体上目的基因插入位置之后的20～35bp同源臂序列，3’端部分为目的基因扩增特异引物；(2)用第一轮PCR扩增引物扩增目的基因；(3)回收第一轮PCR产物，以回收产物作为引物，以环形的目的质粒载体作为模板，进行第二轮PCR反应；(4)消化第二轮PCR产物；(5)取消化后的PCR产物转化大肠杆菌，摇菌提取质粒，鉴定得到含有目的基因的正确重组质粒。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 重叠 延伸 pcr 载体 构建 方法 以及 试剂盒 | ||
【主权项】：
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