[发明专利]一种人体细胞外基质培育用筛选方法在审

专利信息
申请号: 202011620721.4 申请日: 2020-12-30
公开(公告)号: CN112662612A 公开(公告)日: 2021-04-16
发明(设计)人: 沈政;江振华;程顺巧 申请(专利权)人: 武汉北度生物科技有限公司
主分类号: C12N5/00 分类号: C12N5/00;C12Q1/686
代理公司: 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 代理人: 张仁杰
地址: 430000 湖北省武*** 国省代码: 湖北;42
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明公开了一种人体细胞外基质培育用筛选方法,包括筛选浓度确定、细胞种植、转染细胞、培养基培育、细胞传代、细胞筛选,用嘌呤霉素浓度为0μg/ml和6μg/ml以及10μg/ml的新鲜无抗无血清培养基溶液替换培养板各孔中的旧培养基,使细胞进行生存,生存后,嘌呤霉素在5天内杀死所有细胞浓度的为最优浓度培养基。本发明涉及细胞外基质培育技术领域,该人体细胞外基质培育用筛选方法,通过利用转染的方式,使细胞产生抗体,同时不断的转换培养基,用最优浓度培养基进行培育,提高细胞的培育的质量,然后再使细胞进行传代增值,之后提取RNA做RT‑PCR检测,提高细胞的筛选效果,进而对细胞外基质的基因进行相关的研究时,能够提高其研究的精确度。
搜索关键词: 一种 人体 细胞 基质 培育 筛选 方法
【主权项】:
暂无信息
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于武汉北度生物科技有限公司,未经武汉北度生物科技有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/202011620721.4/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 一种在混合活细胞悬浮液中免分离、选择性共价标记目标细胞的方法-202210370892.9
  • 丁霖;鞠熀先;郭玉娜;汪楠;钟艺红;李伟 - 南京大学
  • 2022-04-08 - 2023-10-24 - C12N5/00
  • 本发明涉及一种在混合活细胞悬浮液中免分离、选择性共价标记目标细胞的方法。该方法以适配体修饰的辣根过氧化酶为探针,以酪胺修饰的功能分子为标记分子。探针可在混合活细胞悬浮液中选择性结合目标细胞。加入过氧化氢和标记分子后,探针催化过氧化氢氧化标记分子生成极高反应活性、寿命极短的苯氧自由基。只有目标细胞上的探针可将标记分子共价连接在细胞膜上,溶液中悬浮的探针无法介导细胞标记,从而实现对目标细胞的免分离、选择性、快速标记。该方法适用于含酪胺基团的不同标记分子,并可在目标细胞上同时共价连接多种标记分子。利用标记分子的生物或化学反应可对混合活细胞悬浮液中的目标细胞进行荧光标记和检测以及细胞膜改造。
  • 心肌细胞成熟促进剂-201980023340.7
  • 吉田善纪;三木健嗣;近藤滋 - 国立大学法人京都大学;武田药品工业株式会社
  • 2019-03-28 - 2023-10-24 - C12N5/00
  • 本发明提供了一种心肌细胞成熟促进剂。本发明提供了一种心肌细胞成熟促进剂,其包含选自以下的一种或多种化合物:2‑甲氧基‑5‑((Z)‑2‑(3,4,5‑三甲氧基苯基)乙烯基)苯酚,(2‑(2‑甲氧基‑4‑甲基苯基)‑4‑甲基‑1,3‑噻唑‑5‑基)氨基甲酸(1‑乙基‑1H‑苯并三唑‑5‑基)甲酯,(2’β)‑22‑氧代长春花碱,2‑(2‑(4‑氯苯基)乙基)‑6‑(2‑呋喃基)‑3H‑咪唑并[4,5‑b]吡啶,4,5‑脱水‑1,2‑二脱氧‑4‑甲基‑2‑((N‑(吗啉‑4‑基乙酰基)‑L‑丙氨酰基‑O‑甲基‑L‑酪氨酰基)氨基)‑1‑苯基‑L‑苏式‑戊‑3‑酮糖,3‑(3‑甲氧基苯基)‑N7,N7‑二甲基异喹啉‑1,7‑二胺,4‑(2‑苄基苯甲酰基)‑2,5‑二甲基‑1H‑吡咯‑3‑甲酸甲酯,2’‑(4‑氨基苯基)‑1H,1’H‑2,5’‑联苯并咪唑‑5‑胺,及其盐。
  • 多能干细胞测定-201780071024.8
  • I·斯卢克文;D·黑;D·德里耶 - 洋蓟治疗有限公司
  • 2017-11-15 - 2023-10-20 - C12N5/00
  • 本发明涉及一种用于检测从多能干细胞(PSC)分化的细胞培养物中残留的未分化PSC的方法,该方法包括:在涂覆有层粘连蛋白‑521和E‑钙粘蛋白的基底上在包含ROCK抑制剂的培养基中培养该细胞;对所培养的细胞中残留的未分化PSC的标记物的表达进行定量;并且将在所培养的细胞中的该标记物表达与在包含已知比例的PSC的参比细胞培养物中的标记物表达进行比较,其中该细胞培养物中的标记物表达低于该参比细胞培养物中的标记物表达表明所培养的细胞中不存在残留的未分化PSC或者所培养的细胞中残留的未分化PSC的存在比例低于在该参比细胞培养物中PSC的该已知比例。本发明还涉及一种用于制造治疗组合物的方法和一种用于治疗或预防受试者的病症的方法。
  • 一种细胞分离方法-202311157394.7
  • 迟深;孟锐锋;赵悦;高亚奇 - 苏州欣协生物科技有限公司
  • 2023-09-08 - 2023-10-13 - C12N5/00
  • 本发明涉及一种细胞分离方法,方法包括如下步骤:(1)细胞样本在离心机内离心分层,分层后的细胞样本包括沿离心机中心向外依次分布的内细胞层、外细胞层;(2)在离心分层过程中采集细胞样本分层图像,对采集的细胞样本分层图像进行处理,得到分层后的外细胞层的体积V,(3)转移外细胞层,当离心机内的外细胞层的体积V等于V外设时停止转移,V外设为目标体积值,其中转移外细胞层过程实时采集细胞样本分层图像,并对采集的细胞样本分层图像进行处理。本发明提供的细胞分离方法,实现离心机内保留定量的外细胞层溶液,提高分离精度,提高工作效率,减少因人工操作失误引起的损失,节省人力。
  • 一种马血清去除脂蛋白的生产方法-201911073027.2
  • 张永明;李世明;田元元;王旭;姚丽娜 - 内蒙古维克生生物技术股份有限公司
  • 2019-11-05 - 2023-10-13 - C12N5/00
  • 本发明提供一种马血清去除脂蛋白的生产方法,包括以下步骤:马血清通过无菌纱布粗过滤;滤液A通过过滤柱进行初滤;将上述滤液B通过孔径为0.05~1um改性醋酸纤维素过滤膜;将得到的滤液C再通过截留分子量低于100kD的中空纤维超滤柱进行超滤;将超滤得到的滤液C置于C18树脂中进行层析;层析流出液置于反应罐中,加乙醇沉淀;在上清液A中加入Celite503吸附剂;在上清液B中加入多糖微球吸附剂,制得去除脂蛋白的马血清成品。本发明的方法简便快捷,工艺稳定且适于大批量生产,通过层层过滤以及分离有效去除马血清中的脂蛋白和含纤维蛋白。
  • 包含N-酰基-X-谷氨酰胺二肽的培养基-201880016858.3
  • G·纳奥普;F·梅茨 - 赢创运营有限公司
  • 2018-03-02 - 2023-10-13 - C12N5/00
  • 本发明涉及用于生物技术生产方法的改良培养基、采用该改良培养基的方法和从该方法中获得的产物。本发明的细胞培养基包含来自N‑酰化二肽酰基‑X‑Q的组中的L‑谷氨酰胺和来自其他谷氨酰胺源Q源的组中的L‑谷氨酰胺,其限定的摩尔比为R=n(酰基‑X‑Q)/n(Q源);其中X定义为L‑氨基酸;其中Q定义为通过酰胺键与L‑氨基酸X连接的L‑谷氨酰胺;其中酰基定义为通过酰胺键连接到L‑氨基酸X的氨基末端的C1‑C7‑酰基部分;其中R定义为0.03至20;其中n(酰基‑X‑Q)是在培养基中的所述N‑酰化二肽酰基‑X‑Q的组中包含的L‑谷氨酰胺的物质总量;和其中n(Q源)是在培养基中的所述其他谷氨酰胺源Q源的组中包含的L‑谷氨酰胺的物质总量。其他L‑谷氨酰胺源(Q源)的组中的成分选自:游离的L‑谷氨酰胺、二肽Y‑Q或其混合物,其中Y定义为20种遗传编码的L‑氨基酸中的一种,其中Q定义为通过酰胺键与L‑氨基酸Y连接的L‑谷氨酰胺,其中在二肽Y‑Q中连接Y和Q的酰胺键是普通的主链酰胺键,其涉及氨基酸Y的羧基末端和谷氨酰胺Q的氨基末端。
  • 灌注培养基-201880066108.7
  • H·林;S·王;郑黎黎 - 勃林格殷格翰国际公司
  • 2018-10-10 - 2023-10-03 - C12N5/00
  • 本公开内容提供了例如通过灌注细胞培养,在细胞培养中培养表达异源蛋白质的哺乳动物细胞的方法,其包括在培养基中培养表达异源蛋白质的哺乳动物细胞,所述培养基包含有效量的选自以下的一种或多种脂质或脂质代谢产物:亚油酸、花生四烯酸和前列腺素E2、或其衍生物和/或前体。脂质或脂质代谢产物或其组合可以导致生长抑制和/或增加的生产率,伴随减少的细胞流出。本公开内容还提供了通过在培养基中培养细胞用于增加细胞培养的生产率的方法,所述培养基包含有效量的选自以下的一种或多种脂质或脂质代谢产物:亚油酸、花生四烯酸和前列腺素E2、或其衍生物和/或前体。本公开内容还提供了用于以增加的生产率生产治疗性蛋白质的培养基,其中所述培养基包含选自以下的一种或多种脂质或脂质代谢产物:亚油酸、花生四烯酸和前列腺素E2、或其衍生物和/或前体。
  • 一种细胞贴附性能增强的微载体及其制备方法和应用-202110761732.2
  • 徐胜楠;刘宏斐;赵北辰;李雪良;陈坚;李江华 - 江南大学
  • 2021-07-06 - 2023-10-03 - C12N5/00
  • 本发明公开了一种细胞贴附性能增强的微载体及其制备方法和应用,属于动物细胞培养技术领域。本发明首先将通用型微载体与磷酸缓冲液混合,加入到硅化过的容器并搅拌,插入两个铁电极,并分别与直流电源的正负极相连并接通电源,持续搅拌并通电使铁电极氧化并溶解,停止通电后继续搅拌若干时间,制得铁离子修饰的微载体,将上述铁离子修饰的微载体与磷酸缓冲液分离后,进行无菌化处理即可得到细胞贴附性能增强的微载体。本发明的微载体同时解决了悬浮培养过程中的细胞脱落问题以及细胞生长缓慢问题,使包括但不限于猪骨骼肌卫星细胞等的动物贴壁细胞大规模高密度培养成为可能。
  • 3D细胞培养基质套装及其制备方法-202310762746.5
  • 杨玲 - 武汉圣达威科技有限公司
  • 2023-06-27 - 2023-09-29 - C12N5/00
  • 本发明公开了3D细胞培养基质套装及其制备方法,配方包括:葡聚糖、聚乙烯醇、交联剂、基质蛋白、糖蛋白、RGD肽、糖胺聚糖、蛋白聚糖、生长因子、分泌蛋白、pH调节剂和细胞染料,方法包括步骤一,称取原料;步骤二,制作水凝胶;步骤三,制作ECM组分;步骤四,组分分存;本发明相较于现有的3D细胞培养基质,通过葡聚糖、聚乙烯醇、交联剂的混合来模拟3D环境,避免动物源成分带来的污染可能性;本发明通过控制交联剂的种类与浓度来控制水凝胶的形成速率与硬度,使其可以满足不同实验的需求,提高了适用性;本发明将各类常见的ECM组分备好分存,制成3D细胞培养基质套装,防止用户因缺少某些ECM组分而导致实验进行停滞。
  • 一种穿刺组织的消化处理方案-202310979254.1
  • 吴声鹏;杨文哲;李强;黄海波 - 云准医药科技(广州)有限公司
  • 2023-08-05 - 2023-09-29 - C12N5/00
  • 本发明公开了一种穿刺组织的消化处理方案,包括组织的分离和悬浮、组织的酶消化、消化液的过滤和初步离心、去除红细胞、再次离心、清洗细胞团、丢弃上清和重复清洗和鉴定,本发明通过各种消化酶的组合方案,处理成可以达到单细胞文库上机标准的单细胞悬液,高效的单细胞分离、高纯度的细胞悬液、保留细胞活性以及低样本消耗,有效从有限的穿刺样品中分离出足够数量的单个细胞或小块细胞团,满足下游应用需求,温和的分离条件和多重清洗,可以最大限度保留细胞的活性,并且通过分离设备,有效分离消化液中的小块细胞团,同时最大限度保留细胞的活性,并去除多余的基质,获得高纯度准备用于下游应用的细胞悬液和油包细胞。
  • 仿真组织及其制备方法、对化合物检测的方法-202211079576.2
  • 请求不公布姓名 - 江苏艾玮得生物科技有限公司
  • 2022-09-05 - 2023-09-29 - C12N5/00
  • 本发明提供一种仿真组织及其制备方法、对化合物检测的方法,属于体外三维组织培养技术领域。仿真组织包括:细胞外基质以及均匀掺杂在细胞外基质中的间质细胞,细胞外基质经由第一溶液和第二溶液混合并调整pH值至预设范围时呈溶液状态,以用于与间质细胞混合;第一溶液溶解有第一组分,第二溶液溶解有第二组分,第一组分为I型胶原,第二组分包括甲基丙烯酰化明胶和甲基丙烯酰化透明质酸;第一溶液和第二溶液混合后的溶液中,I型胶原质量为混合溶液的0.1%~0.3%,甲基丙烯酰化明胶质量为混合溶液的1%~5%,甲基丙烯酰化透明质酸质量为混合溶液的0.01%~0.2%。本发明形成了机械强度均匀的仿真组织,能够有效阻止仿真组织中细胞生长导致的收缩与降解。
  • 化学上确定的血清白蛋白替代物-202180088701.3
  • J·杰西;D·库宁格;S·施因 - 生命技术公司
  • 2021-12-15 - 2023-09-22 - C12N5/00
  • 本文尤其提供了替代或部分替代细胞培养基中的白蛋白的化学上确定的组分和组合物。这些组分和组合物可以支持细胞培养、保护细胞或增强所培养的细胞的活力。还提供了用于含有白蛋白的细胞培养基中的化学上确定的培养基补充物。这些化学上确定的培养基补充物可以挽救细胞免受白蛋白诱导的毒性。
  • 一种可用于细胞培养的鱼鳞组织支架的制备方法-202010594988.4
  • 请求不公布姓名 - 中国海洋大学
  • 2020-06-28 - 2023-09-22 - C12N5/00
  • 本发明公开了一种可用于细胞培养的鱼鳞组织支架的制备方法,采用鱼鳞为原料,对鱼鳞分别进行脱细胞、一次脱钙、二次脱钙处理,75%酒精浸泡和紫外照射杀菌,吸附牛血清白蛋白后经京尼平固化处理得到三种鱼鳞支架材料,用于细胞的贴壁培养,本发明的鱼鳞细胞支架材料具有良好的细胞亲和性、引导细胞定向迁移生长的能力,有利于快速修复细胞缺损,提示本发明的鱼鳞支架在细胞培养和组织工程领域具有良好的应用前景。
  • 一种外泌体分离制备方法-202310693637.2
  • 李秀梅;张雍承;李静韬 - 隆泰银信生物科技有限公司
  • 2023-06-13 - 2023-09-19 - C12N5/00
  • 本发明公开了一种外泌体分离制备方法,涉及外泌体分离技术领域,具体包括以下步骤:S01:初次分离:对待分离的生物样品进行离心处理,去除提取液中的细胞杂质,得到初提液;S02:再次分离:对初次分离后的生物样品进行再次分离,去除细胞碎片和蛋白杂质,得到上清液;S03:复合层析:将上述上清液进行复合层析处理,得到穿流液;S04:浓缩:将上述穿流液通过超滤膜进行超滤浓缩,得到浓缩液;S05:纯化。本发明外泌体分离方法生产周期较短,操作工序简单,成本较低,采用本发明方法分离出的外泌体样品其纯度高度100%,收率高达56%,本发明能够在保证外泌体高纯度的同时,实现外泌体的高收率。
  • 一种细胞培养用明胶微球载体及其制备方法和应用-202310799473.1
  • 何世强;雷洋;邓向雷;彭银鹤;陈克明;周犀利 - 诺千健康生物科技有限公司
  • 2023-07-03 - 2023-09-12 - C12N5/00
  • 本发明通过中空硼硅酸微珠掺杂明胶微球载体后,依次对明胶微球载体进行直径筛选和沉降速率筛选,便可获得具有合适直径范围和较小沉降速率的明胶微球载体。本发明通过在明胶微球载体内掺杂有中空硼硅酸微珠使得其密度略高于细胞培养用培养基的密度,从而在将明胶微球载体加入到培养基中后能够具有较小的沉降速率,仅需极低的搅拌转速就能实现明胶微球载体充分悬浮;除此之外,由于本发明中明胶微球载体的内部分布了中空硼硅酸微珠,降低了单个载体中明胶所占的比例,因此能够提高载体降解速率、细胞的收获效率及最终存活率。
  • 用于使用多能干细胞来源的皮肤类器官构建特应性皮炎模型的方法-202180071683.8
  • 康景宣;郑松义 - 康干细胞生物科技有限公司
  • 2021-10-21 - 2023-09-08 - C12N5/00
  • 本发明涉及一种用于从人多能干细胞构建特应性皮炎皮肤类器官的方法。观察到本发明的ALI皮肤类器官形成了与真实皮肤中的那些类似结构的皮肤细胞、附属物、神经细胞、脂肪细胞等,并表现出与通过常规培养方法构建的皮肤类器官相比极大改善的毛囊生长。此外,由于用金黄色葡萄球菌处理以构建特应性皮炎模型,对特应性皮炎的特征进行了良好模拟,例如皮肤屏障受损、上皮来源细胞因子增加、表皮干细胞表达下调、引起金黄色葡萄球菌菌落等。因此,预期本发明的皮肤类器官可有利地用作真实皮肤模型和特应性皮炎模型。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top