[发明专利]一种超大质粒的体外组装方法及其应用在审
| 申请号： | 201911382968.4 | 申请日： | 2019-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN110951759A | 公开（公告）日： | 2020-04-03 |
| 发明（设计）人： | 朱佑民;杨平;孙健;柳伟强;刘敏祥;严成丽;邢妍婧;赵一凡 | 申请（专利权）人： | 苏州泓迅生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/63 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市苏州工业*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种超大质粒的体外组装方法及其应用，所述方法包括采用组装片段与线性化组装载体进行体外组装的步骤；所述组装片段的长度不小于1kb；所述组装片段与所述线性化组装载体的摩尔比为(2～6):1。本发明采用每轮片段数量逐级递减的方式，在体外经过多轮组装构建超大质粒，解决了体外组装超大质粒成功率低的问题，同时避免了酵母体内组装时酵母菌生长缓慢、酵母中抽提质粒质量差的问题，成功率高，经过多轮重组后便可获得超大质粒，加快了超大质粒合成速率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 超大 质粒 体外 组装 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
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- 刘田田;李涛 - 河南中医药大学
- 2022-05-21 - 2022-11-11 - C12N15/66
- 本发明提供了一种pBiflu荧光标签表达载体的制备方法，该方法为：制备KpnI/XhoI双酶切pGL3 Basic载体的回收产物，最终HindIII/BglII双酶切中间载体pGL‑35S‑35S‑mCherry的回收产物，得到pBiflu荧光标签表达载体，还提供了应用，用于植物原生质体的转化，基因启动子转录活力的检测。
- 枯草芽孢杆菌CRISPR-Cas9基因组编辑系统-201910888889.4
- 王智文;刘丁玉;黄灿;辛国省;陈涛 - 天津大学
- 2019-09-19 - 2022-09-27 - C12N15/66
- 本发明公开了枯草芽孢杆菌CRISPR‑Cas9基因组编辑系统，该系统的构建方法为：1)构建质粒pBSCas9；2)构建质粒pDonor；3)构建构建多位点gRNA表达过程中辅助质粒pHG；4)由pBSCas9，pDonor和pHG组成枯草芽孢杆菌CRISPR‑Cas9基因组编辑系统。本发明解决了目前枯草芽孢杆菌传统基因组编辑技术中存在的问题，不引入任何“负筛选”标记，构建了高效率、高精确度的CRISPR‑Cas9和CRISPR‑Cas9n基因组无痕编辑系统。且可实现单位点和多位点等不同类型的基因编辑操作，同时实现编辑流程的迭代编辑循环。
- 一种高亲和力动态捕获DNA双链断裂修复相关蛋白的方法-202210708697.2
- 蔡木炎;项志成;段金玲;谢丹;陈杰伟;周洁 - 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所）
- 2022-06-21 - 2022-09-02 - C12N15/66
- 本发明公开一种高亲和力动态捕获DNA双链断裂修复相关蛋白的方法,属于生物技术及细胞生物学领域。所述方法先将归位内切酶I‑sceI与突变型生物素连接酶BirA*连接构建融合表达质粒，然后构建DNA同源重组修复报告模式细胞(以下简称DR‑GFP)，再用融合表达质粒转染DR‑GFP模式细胞，靶向诱导模式细胞发生DNA双链断裂，使得DNA双链断裂修复蛋白募集于损伤位点启动修复，同时融合蛋白中的生物素连接酶将损伤位点及邻近参与修复的内源性蛋白进行生物素化，通过链霉亲和素‑生物素分离法捕获相关蛋白分子。这种方法可以高效捕获DNA双裂断裂修复过程中的所有蛋白分子，弥补了传统蛋白互作技术的不足，具有快捷、高效、廉价等优点。
- 专利分类
