[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9技术获得甘蓝型油菜黄籽种质的方法在审

专利信息
申请号: 201911139555.3 申请日: 2019-11-20
公开(公告)号: CN110777164A 公开(公告)日: 2020-02-11
发明(设计)人: 谢涛;王幼平;蒋金金;陈鑫;戎浩;郭图丽;蒋波 申请(专利权)人: 扬州大学
主分类号: C12N15/84 分类号: C12N15/84;C12N15/113;C12N15/29;A01H5/10;A01H6/20
代理公司: 32224 南京纵横知识产权代理有限公司 代理人: 刘妍妍
地址: 225009 *** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明属于基因工程技术领域,涉及一种基于CRISPR/Cas9技术获得甘蓝型油菜黄籽种质的方法,利用CRISPR/Cas9系统对甘蓝型油菜BnMYB123基因进行基因编辑从而获得BnMYB123基因功能缺失的黄籽甘蓝型油菜,BnMYB123在甘蓝型油菜中存在两个拷贝,其基因编码区序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示,序列长度为786bp。BnMYB123能够调控异鼠李素及表儿茶素的合成和积累,从而调控甘蓝型油菜的种皮颜色。本发明为油菜黄籽种质的育种工作提供了一种全新的途径,为甘蓝型油菜黄籽种质的开发提供了理论依据。
搜索关键词: 甘蓝型油菜 黄籽甘蓝型油菜 基因编码区序列 基因工程技术 合成和积累 表儿茶素 基因功能 技术获得 异鼠李素 种皮颜色 基因 调控 拷贝 油菜 育种 开发
【主权项】:
1.一种基于CRISPR/Cas9技术获得甘蓝型油菜黄籽种质的方法,其特征在于:利用CRISPR/Cas9技术对甘蓝型油菜BnMYB123基因进行定向编辑从而得到BnMYB123基因功能缺失的甘蓝型油菜,所述方法包括如下步骤:/n在甘蓝型油菜BnMYB123外显子区域选取以碱基NGG结尾的DNA片段作为靶位点,其中,N代表碱基A、G、C、T中的任意一种;/n利用所述靶位点,构建用于甘蓝型油菜BnMYB123基因定向编辑的CRISPR/Cas9重组载体;/n将重组载体通过电转化的方法转化根癌农杆菌GV3101中;/n用所述含有重组载体的根癌农杆菌GV3101转化甘蓝型油菜,获得转基因再生植株;/n对获得的转基因再生植株中BnMYB123基因包含所述靶位点的DNA区域进行扩增并测序;/n选择BnMYB123两个拷贝及两个等位基因都发生编辑的再生株系,进行表型观察,获得种皮颜色变黄的株系。/n
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