[发明专利]检测血液中利培酮和9-羟基利培酮的方法

摘要

本发明提供了检测血液中利培酮及9‑羟基利培酮的方法包括：制备利培酮及9‑羟基利培酮标准储备液、制备利培酮及9‑羟基利培酮标准中间液、制备内标工作液和制备标准溶液，利用液相色谱‑质谱联用仪检测标准溶液，拟合得到利培酮及9‑羟基利培酮对应的标准曲线方程分别为：y

主权项

1.一种检测血液中利培酮和9-羟基利培酮的方法，其特征在于：它包括以下步骤：/n(一)标准溶液的标定/n(a)制备利培酮和9-羟基利培酮标准储备液/n精确称取利培酮标准品2.38mg置于2mL冻存管，用含水量为0％-30％的甲醇溶液进行溶解，并定容于1mL，得到利培酮标准储备液，在-80℃条件下保存；/n精确称取9-羟基利培酮标准品1.87mg置于10mL容量瓶，用含水量为30％-80％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10mL，得到9-羟基利培酮标准储备液，在-80℃条件下保存；/n(b)制备利培酮和9-羟基利培酮的标准中间液/n将上述步骤(a)的利培酮标准储备液和9-羟基利培酮标准储备液分别用含水量为10％～80％甲醇稀释液稀释成10mg/L的标准过渡中间液，再按照1∶1的体积混合，用含水量为10％～80％甲醇稀释液稀释上述利培酮和9-羟基利培酮的标准过渡中间液，制成含有浓度为5ng/mL～1000ng/mL的利培酮和浓度为5ng/mL～1000ng/mL的9-羟基利培酮的至少三种浓度的利培酮和9-羟基利培酮标准中间液，并在-80℃条件下保存；/n(c)制备内标工作液/n将100mg/L的利培酮d4储备液和1000mg/L的9-羟基利培酮d4储备液按照10∶1的体积混合，得到混合液，上述混合液中所含的利培酮-d4储备液和9-羟基利培酮-d4储备液的浓度相同，用含水量为10％～80％甲醇稀释液稀释上述混合液，得到一种含有50～250ng/mL利培酮-d4和含有50～250ng/mL 9-羟基利培酮-d4的内标工作液，并在-80℃条件下保存；/n(d)制备标准溶液/n分别移取10μL上述至少三种浓度的利培酮和9-羟基利培酮的标准中间液，在上述每一种利培酮和9-羟基利培酮的标准中间液中分别加入10μL的内标工作液和390μL含水量为70％甲醇稀释液，并在转速为1000～2000rpm下涡旋混匀30s～1min，制成至少三种不同浓度的标准溶液，其中，每一种浓度的标准溶液中包含的内标物的浓度相同；/n(e)拟合标准曲线方程/n利用液相色谱-质谱联用仪检测上述每一种浓度的标准溶液，得到至少三种不同浓度的标准溶液的利培酮和利培酮-d4、9-羟基利培酮和9-羟基利培酮-d4的色谱峰峰面积，分别以上述至少三种不同浓度的标准溶液中的利培酮的色谱峰峰面积与利培酮-d4的色谱峰峰面积的比值作为标准曲线方程的纵坐标y