[发明专利]利用Cas12a蛋白筛选双等位基因突变细胞株的方法在审
| 申请号： | 201910731059.0 | 申请日： | 2019-08-08 |
| 公开（公告）号： | CN110438161A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 张国良;肖国辉;刘淑燕;贺星;张苏;欧敏 | 申请（专利权）人： | 深圳市第三人民医院 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;G01N21/64 |
| 代理公司： | 深圳市深弘广联知识产权代理事务所(普通合伙) 44449 | 代理人： | 向用秀 |
| 地址： | 518000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用Cas12a蛋白筛选双等位基因突变细胞株的方法，主要用于筛选基于CRISPR/Cas9编辑后的双等位基因突变细胞株;解决双等位基因突变细胞株难以筛选出的技术难题。本发明基于Cas12a蛋白（包括所有细菌来源）开发出的核酸检测技术能够简单、高效、稳定地筛选CRISPR/Cas9编辑后的双等位基因突变阳性细胞，此法且可以部分代替测序法，大大降低筛选的成本。 | ||
| 搜索关键词： | 等位基因突变 细胞株 筛选 蛋白筛选 核酸检测技术 技术难题 细菌来源 阳性细胞 测序法 蛋白 开发 | ||
【主权项】：
1.一种利用Cas12a蛋白筛选双等位基因突变细胞株的方法，其特征在于，包括以下步骤：设计gRNA序列：根据CRISPR/Cas9的编辑位点的序列设计gRNA；gRNA合成：运用T7转绿酶体外合成；引物设计：设计特异性引物扩增靶基因序列；切割反应：gRNA引导Cas12a与靶基因结合，激活Cas12a的反式切割活性，从而切割荧光报告底物single strand DNA‑FQ(ssDNA‑FQ)，产生荧光；荧光检测：使用仪器检测切割底物后的荧光，若检测到强烈的荧光则为未突变株或者单等位基因突变株，若为检测到荧光或者弱荧光则为双等位基因突变细胞株。
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