[发明专利]一种非嵌合基因编辑猪胚胎模型的构建方法有效

专利信息
申请号: 201910616058.1 申请日: 2019-07-09
公开(公告)号: CN110452929B 公开(公告)日: 2021-07-20
发明(设计)人: 黄军就;苏小虎 申请(专利权)人: 中山大学
主分类号: C12N15/877 分类号: C12N15/877;C12N5/10;C12N15/90;C12N15/89;C12N15/113
代理公司: 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 代理人: 孙凤侠
地址: 510275 广东*** 国省代码: 广东;44
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要: 发明公开了一种非嵌合基因编辑猪胚胎模型的构建方法。具体是一种基于生发泡时期卵胞质显微注射基因编辑体系制备非嵌合基因编辑猪胚胎的方法,该方法中,猪生发泡时期卵子经胞质显微注射基因编辑系统后,可对靶标基因进行编辑,得到基因编辑成熟卵子;胞质显微注射基因编辑系统猪生发泡时期卵子,经体外成熟培养和体外授精,可高效得到非嵌合基因编辑胚胎。本发明对快速构建非嵌合母系基因编辑F0胚胎,对快速生产大动物疾病模型和新品种培育均具有重要的应用价值。
搜索关键词: 一种 嵌合 基因 编辑 胚胎 模型 构建 方法
【主权项】:
1.一种非嵌合基因编辑猪胚胎模型的构建方法,其特征在于,首先通过猪生发泡时期卵子胞质显微注射基因编辑体系对靶标基因进行编辑,获得靶标基因编辑成熟卵子;进而对靶标基因编辑成熟卵子进行体外授精,获得非嵌合靶标基因编辑猪胚胎。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中山大学,未经中山大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/patent/201910616058.1/,转载请声明来源钻瓜专利网。

同类专利
  • 产生基因修改的动物的方法-202310378026.9
  • 杨璐菡 - E开创生物技术股份有限公司
  • 2018-04-20 - 2023-09-12 - C12N15/877
  • 本公开提供了产生多重基因修改的动物的方法,例如,猪内源性逆转录病毒(PERV)失活的猪。本公开还提供了提高多重转基因动物出生率的方法。在一些实施方式中,本公开涉及猪细胞的产生和使用,其中猪内源性逆转录病毒(PERV)部分已灭活。在一些实施方式中,克隆无PERV或PERV减少的猪细胞以产生猪胚胎。在一些实施方式中,无PERV或PERV减少的胚胎可生长为成年猪,从中可提取器官和/或组织并用于异种移植到例如人类的非猪动物中。
  • 一种注射精子蛋白体细胞核移植的方法-202310657320.3
  • 赵娟;屈鹏祥;刘恩岐 - 西安交通大学医学院第一附属医院;西安交通大学
  • 2023-06-05 - 2023-08-25 - C12N15/877
  • 本发明公开了一种注射精子蛋白体细胞核移植的方法,属于细胞体外培养技术领域。将清洗过的精子反复冻融,然后将体积比为1:5的精子和氯化钠溶液混匀,取上清,离心,得到精子蛋白,再将提取到的精子蛋白注入融合后的供核细胞和去核的卵母细胞内,然后进行胚胎激活和胚胎移植。该方法采用将精子蛋白注射到克隆胚胎的方法,能够弥补传统克隆胚胎缺失精子源调控因子的缺陷。获得精子蛋白的克隆胚胎具有较低的异常胚胎分裂比率,以及较高的发育能力。
  • 一种基于体细胞核移植技术构建三倍体猪的方法-202310428547.0
  • 魏红江;角德灵;郭建雄;魏太云 - 云南农业大学
  • 2023-04-20 - 2023-08-25 - C12N15/877
  • 本发明涉及一种基于体细胞核移植技术构建三倍体猪的方法。本发明在体外建立二倍体猪细胞系,以此为核供体进行体细胞核移植,经电融合、电激活后构建克隆胚,检测其克隆胚的体外发育潜力,进一步移植至代孕母猪中继续发育,适时根据B超监测结果获取胎儿,建立胎儿成纤维细胞系进行倍性鉴定及核型分析。以三倍体猪胎儿成纤维细胞为核供体再次体细胞核移植,经电融合、电激活后构建克隆胚,检测其克隆胚的体外发育能力,并进一步移植至代孕母猪体内,生产三倍体猪。本发明克服了猪三倍体胚胎发育效率低、成功率低的问题,对三倍体猪的生产及应用具有重要的意义。
  • 一种通过秋水仙素诱导多倍体猪的方法-202310428544.7
  • 魏红江;角德灵;郭建雄;魏太云 - 云南农业大学
  • 2023-04-20 - 2023-08-25 - C12N15/877
  • 本发明涉及一种通过秋水仙素诱导多倍体猪的方法。本发明针对二倍体猪成纤维细胞系,利用不同浓度的秋水仙素诱导,通过检测不同浓度诱导后的细胞倍性变化,筛选最佳的秋水仙素浓度,进一步诱导生产多倍体猪细胞系,以此为体细胞核移植的核供体构建猪多倍体克隆胚,再进行胚胎移植生产四倍体猪。本发明首次将秋水仙素成功应用于猪多倍体的诱导中,对促进多倍体猪的生产及育种应用研究具有重要的意义。
  • 产生基因修改的动物的方法-202310377436.1
  • 杨璐菡 - E开创生物技术股份有限公司
  • 2018-04-20 - 2023-08-08 - C12N15/877
  • 本公开提供了产生多重基因修改的动物的方法,例如,猪内源性逆转录病毒(PERV)失活的猪。本公开还提供了提高多重转基因动物出生率的方法。在一些实施方式中,本公开涉及猪细胞的产生和使用,其中猪内源性逆转录病毒(PERV)部分已灭活。在一些实施方式中,克隆无PERV或PERV减少的猪细胞以产生猪胚胎。在一些实施方式中,无PERV或PERV减少的胚胎可生长为成年猪,从中可提取器官和/或组织并用于异种移植到例如人类的非猪动物中。
  • Slc6a11基因及其蛋白的用途-201610915847.1
  • 应悦;孙瑞林;匡颖 - 上海南方模式生物科技股份有限公司
  • 2016-10-20 - 2023-02-17 - C12N15/877
  • 本发明提供了Slc6a11基因及其蛋白的用途,具体地,本发明提供了一种非人哺乳动物的痛觉耐受动物模型的制备方法,该方法包括以下步骤:(1)提供一非人哺乳动物胚胎干细胞,将所述细胞中的Slc6a11基因失活,得到Slc6a11基因失活的胚胎干细胞;(2)利用所述的Slc6a11基因失活的胚胎干细胞和一野生型囊胚,制备一嵌合囊胚;(3)利用所述的嵌合囊胚,制备痛觉耐受动物模型。本发明提供的痛觉耐受动物模型对痛觉刺激不敏感,可以被用于痛觉的相关研究,并可以用于特定药物的筛选和测试试验。
  • Slc6a13基因及其蛋白的用途-201610915947.4
  • 孙瑞林;刘震泽;匡颖;黄丹丹 - 上海南方模式生物科技股份有限公司
  • 2016-10-20 - 2022-11-29 - C12N15/877
  • 本发明提供了Slc6a13基因及其蛋白的用途,具体地,本发明提供了一种非人哺乳动物的肝损伤动物模型的制备方法,该方法包括以下步骤:(1)提供非人哺乳动物的细胞,将所述细胞中的Slc6a13基因失活,得到Slc6a13基因失活的细胞;(2)利用所述的Slc6a13基因失活的胚胎干细胞和一野生型囊胚,制备一嵌合囊胚;(3)利用所述的嵌合囊胚,制备肝损伤动物模型。本发明提供的肝损伤动物模型一种有效的急性肝衰竭动物模型,可用于研究急性肝衰竭,并可以用于特定药物的筛选和测试试验。
  • 髓母细胞瘤动物模型及其建立与应用-201910855130.6
  • 高维强;王明磊;杨茹 - 上海交通大学医学院附属仁济医院
  • 2019-09-10 - 2022-11-01 - C12N15/877
  • 本发明提供了一种髓母细胞瘤动物模型及其建立与应用。本发明的动物模型细胞中Patched蛋白的表达或活性下降且Trim32蛋白的表达或活性下降。本发明还提供了所述非人哺乳动物模型的构建方法,以及同时携带小脑前体细胞标记物和早期分化细胞标记物的髓母细胞瘤的非人哺乳动物模型的制备方法。本发明的非人哺乳动物是一个更有效的髓母细胞瘤(MB)模型,MB发病率较现有经典模型大大提高,可以作为优秀的筛药和实验研究的动物模型。
  • 一种基于细胞朝向的定量去核方法-202010861832.8
  • 赵启立;赵新;邱金禹;孙明竹;韩宇;贾祎晴 - 南开大学
  • 2020-08-25 - 2022-06-07 - C12N15/877
  • 本发明涉及一种基于细胞朝向的定量去核方法,包括以下步骤:S1,对细胞核抽取过程有限元建模确定去核所需胞质去除量在关于细胞核‑微针相对位置下的分布;S2,对细胞核进行染色在荧光场下定位细胞核相对于极体的三维分布范围;S3,结合以上两步结果确定一个极体在焦平面上点位作为去核操作时的细胞朝向;S4,转动细胞至该方向吸取定量胞质进行去核。本发明利用细胞核抽取过程的有限元建模与离线确定的细胞核相对于极体三维分布范围确定去核时的极体点位,自动控制胞质去除量,可实现10%去核量下96%的去核成功率。
  • 一种牙本质发育不全的点突变动物模型构建方法及其应用-202010881234.7
  • 蒋婧;李劲松 - 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心
  • 2020-08-27 - 2022-03-01 - C12N15/877
  • 本发明涉及基础科研用动物模型领域,特别是涉及一种牙本质发育不全的点突变动物模型的构建方法及其应用。所述牙本质发育不全的点突变动物模型的构建方法,包括将具有DSPP基因c.144+1GA或c.144+1GT点突变的孤雄单倍体胚胎干细胞与卵细胞结合获得细胞胚胎;培育所述细胞胚胎即获得DGI疾病动物模型。所述构建方法还包括在c.144+1GA或c.144+1GT点突变的DSPP基因上插入有标签。本发明的动物模型的构建方法简洁,为研究病人基因突变对DSPP蛋白表达及功能的影响,以及明确病人杂合突变是如何造成DGI疾病表型提供方法。
  • 利用体细胞克隆制备克隆马胚胎的方法-202110975206.6
  • 米继东;赵建平;郑敏 - 北京希诺谷生物科技有限公司
  • 2021-08-24 - 2021-12-31 - C12N15/877
  • 本发明涉及一种利用体细胞克隆制备克隆马胚胎的方法,所述方法包括:体细胞的分离培养;马卵母细胞成熟培养;制备去核的卵母细胞;脱去卵母细胞的透明带,将供体细胞和无透明带的胞质体粘在一起;将供体细胞核导入去核卵母细胞的细胞质中;激活融合的重构胚;将克隆胚胎体外培养至囊胚;将囊胚冷冻保存。本发明提供的方法可以构建稳定成熟的克隆马胚胎生产和保存技术平台,为克隆马商业化生产奠定基础。
  • 促进骨骼肌发育的方法和应用-202010736684.7
  • 吴珍芳;顾婷;谭宝华;周健;甘炎民;邢萍萍;乔佳鑫;严冠豪;蔡更元;李紫聪;洪林君;杨杰;郑恩琴;黄思秀;徐铮 - 华南农业大学
  • 2020-07-28 - 2021-12-21 - C12N15/877
  • 本发明公开了一种促进骨骼肌发育的方法,该方法包括在胚胎水平超表达MAP3K14基因。由此,不仅发现了一个在猪骨骼肌发育过程中受H3K27me3修饰作用的一个关键靶基因MAP3K14,该基因的富集水平在猪骨骼肌肌纤维形成过程中在H3K27me3的修饰作用下先上调后下调,并能够促进猪骨骼肌卫星细胞的增殖功能进而促进猪骨骼肌的发育;还可以通过超表达MAP3K14基因,来促进猪骨骼肌的发育,从而为提高猪的瘦肉率提供了一种新的方法和靶点,以及研究的新方向;再者,超表达MAP3K14基因在促进骨骼肌发育上的应用,可为瘦肉型猪的选育提供新的思路和靶点;另外,在猪的胚胎时期通过超表达MAP3K14基因,通过多种不同的方法均能达到促进骨骼肌发育的效果,具有广泛的适用性。
  • 一种非嵌合基因编辑猪胚胎模型的构建方法-201910616058.1
  • 黄军就;苏小虎 - 中山大学
  • 2019-07-09 - 2021-07-20 - C12N15/877
  • 本发明公开了一种非嵌合基因编辑猪胚胎模型的构建方法。具体是一种基于生发泡时期卵胞质显微注射基因编辑体系制备非嵌合基因编辑猪胚胎的方法,该方法中,猪生发泡时期卵子经胞质显微注射基因编辑系统后,可对靶标基因进行编辑,得到基因编辑成熟卵子;胞质显微注射基因编辑系统猪生发泡时期卵子,经体外成熟培养和体外授精,可高效得到非嵌合基因编辑胚胎。本发明对快速构建非嵌合母系基因编辑F0胚胎,对快速生产大动物疾病模型和新品种培育均具有重要的应用价值。
  • 哺乳动物体细胞克隆方法和使用的培养液-201710806337.5
  • 许晓椿;王小武;郭晶;迟大明;钟原;王娜 - 天津博裕力牧科技有限公司
  • 2017-09-08 - 2019-11-08 - C12N15/877
  • 本发明公开了一种哺乳动物例如牛或犬或羊的体细胞克隆方法和使用的培养液。其中哺乳动物体细胞克隆的方法包括以下处理哺乳动物体细胞克隆胚的步骤:1)将待移植的哺乳动物体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合,在电融合后1h,挑选成功融合的哺乳动物体细胞克隆胚进行激活处理;2)哺乳动物体细胞克隆胚在进行激活处理后,转移到G1.3培养液中进行培养。还涉及上述方法中使用的培养液。本发明方法呈现如说明书所述优异技术效果。
  • 条件性过表达Spp1基因的H11定点敲入杂合子小鼠模型及其构建方法-201610916076.8
  • 张国玺;邹晓峰;肖观称;徐刚;夏维 - 赣南医学院第一附属医院
  • 2016-10-21 - 2019-08-13 - C12N15/877
  • 本发明公开了一种条件性过表达Spp1基因的H11定点敲入杂合子小鼠模型及其构建方法,构建方法为:先获得可诱导型Spp1过表达转基因载体;再获得转基因F0代小鼠;与野生型小鼠交配,传代建系,获得F1代小鼠;选择在骨髓、脾脏、淋巴结以及胸腺均高表达的F1代小鼠作为后续的实验品系,获得转基因工具小鼠;将转基因工具小鼠与Cre转基因小鼠交配,即得。本发明构建得到的转基因小鼠模型为可诱导的白血病模型,在没有诱导剂的情况下Spp1不表达不发病,在诱导剂作用的情况下Spp1过表达,引发白血病的发生,较常规的转基因小鼠模型具有更好的可控性,可根据实验需要调整需维持的种群数量。
  • 一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法-201611270683.8
  • 李奎;刘志国;牟玉莲;郑新民;毕延震 - 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
  • 2016-12-30 - 2019-08-09 - C12N15/877
  • 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法。本发明提供了毛壳素的应用,为如下(a1)‑(a5)中的至少一种:(a1)制备用于动物体细胞核移植的供核细胞培养液;(a2)制备用于动物体细胞核移植的重构胚胎培养液;(a3)培养用于动物体细胞核移植的供核细胞;(a4)培养用于动物体细胞核移植的重构胚胎;(a5)促进动物体细胞核移植中的重构胚形成囊胚。本发明通过利用小分子药物毛壳素对体细胞核移植中的供核细胞或者重构胚胎进行处理,促进体细胞核移植重编程的发生,显著提高克隆胚胎的囊胚发育率和囊胚细胞数,最终提高猪体细胞核移植技术的整体效率。本发明对提高猪体细胞核移植技术的整体效率有重要意义。
  • 一种利用体细胞克隆技术培育地方优良家畜品种的方法-201611224097.X
  • 魏红江;王文;卿玉波;赵红业;角德灵 - 云南农业大学
  • 2016-12-27 - 2019-07-12 - C12N15/877
  • 本发明涉及一种利用体细胞克隆技术培育地方优良家畜品种的方法。利用体细胞克隆技术培育家畜优良品种,通过从家畜群体中筛选出经济性状优良的个体,建立成纤维细胞系,利用体细胞核移植技术对上述筛选出的个体进行克隆,待克隆出生的个体达到适配年龄后,进行组合杂交,再对每一杂交组合的F1代个体的经济性状进行鉴定,对达不到选育标准的F1代个体父母,查明是父代还是母代遗传引起的性状,然后对相应的父母个体进行淘汰,对留下的后代个体中可以稳定遗传的父母再进行组群,选育出优良家畜品种。通过对本发明的实施,能批量地获得具有极其优良经济性状的家畜个体,实现家畜特有品种资源的可持续开发利用,提高家畜的育种效率和选育的成功率。
  • 制备克隆小型动物胚胎的方法-201410189550.2
  • 陈玉;李杏;李林;杨珍珍;杜玉涛 - 深圳华大方舟生物技术有限公司;深圳华大基因科技有限公司
  • 2014-05-06 - 2019-01-08 - C12N15/877
  • 本发明公开了制备克隆小型动物胚胎的方法,其包括以下步骤:提供离体的供体核细胞;提供离体的卵母细胞;于含有透明带消化剂的卵母细胞去核液中,将卵母细胞进行去核处理,以便获得去核卵母细胞;将去核卵母细胞与供体核细胞融合,以便获得重构胚;将重构胚进行体外激活,以便获得激活的重构胚;以及将激活的重构胚进行培养,以便获得克隆小型动物胚胎。采用本发明的方法,能够在消化卵母细胞透明带的同时,适时快速进行切割去核,从而操作人员可以精确的把握去核时间,成功实现卵母细胞去核,并保证囊胚形成率,高效制备克隆小型动物胚胎。
专利分类
×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

400-8765-105周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top